应用pET28（含T7lac启动子和His6-tag）质粒,将人γTNFβ融合基因与之组建成pETγLT表达质粒,并转化于E.coliBL21（DE3）.本文对pETγLT/ BL21（DE3）工程菌的His6-γTNFβ重组产物进行了诱导表达,分离纯化的研究.结果表明,该工程菌用LB培养基在37℃扩增至OD590为0.5左右,加IPTG（终浓度为1mmol/L）诱导5小时,此时His6-γTNFβ的表达量可占菌体总蛋白的45%.重组产物绝大多数以IBs形式存在于菌体中.工程菌经反复超声破碎、高速离心,得IBs粗制品后,再经含2mol/L脲的缓冲液洗涤可得到相对纯净的IBs.然后用7mol/L脲变性溶解IBs,离心取上清,进行Ni2+-Sepharose 6B柱一步法亲和层析,可得到电泳纯度为95%的His6-γTNFβ,经稀释复性和用凝血酶切去His6-tag的产物,其细胞毒活性为（1.2～2.0）×107U/mgp,抗病毒活性为（6.0～6.6）×106U/map.

国家自然科学基金(39670815)资助项目