采用辛酸-硫酸铵沉淀法从大鼠杂交瘤腹水中纯化大鼠抗人肝癌BEL-7402细胞单克隆抗体3A5,纯度大于90%,抗体类型为IgGI型,与人肝癌BEL-7402细胞及小鼠结肠癌C-26细胞均有强免疫反应性.为探讨Fab’片段制备方法,首先分别以胃蛋白酶、菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶消化3A5,结果表明3种酶均可使3A5酶解产生F(ab’)_2,其中以胃蛋白酶法在合适的反应条件下产生的F(ab’)_2产率较高,与BEL-7402细胞的免疫反应性为完整抗体的60%.在此基础上,以二巯基苏糖醇(DTT)还原F(ab’)_2并以DE-52纯化可以得到保留了抗体绞链区巯基的Fab’片段,可用于药物的定向偶联,其与BEL-74O2细胞的免疫反应性约为完整抗体的20%.以葡聚糖T-40(DextranT-40)为中介体,将Fab’与抗肿瘤抗生素平阳霉素相偶联,制得偶联物.偶联分子比为1:50.氯代三苯基四氟唑(TTC)抑菌效价检测法测定偶联物中平阳霉素

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