初步观察局部直接注射肿瘤坏死因子α质粒DNA时肿瘤的治疗作用.采用定向克隆技术,以BamH和Xhol由pBluescript克隆载体上切下702bp的TNF-α基因片段,再以TDNA连接酶将其克隆至pcDNA3真核表达载体上,构建了pcTNF-α真核表达质粒;转化致敏菌,筛选阳性重组体并扩增;用脂质体介导,将pcTNFα-转染于Hela细胞,取培育24h的Hela细胞(10个),加过柱纯化的DNA20μg,脂质体10μl,37℃,5%CO_2培养过夜,收集转染细胞培养上清,利用MTT法测定pcTNF-α生物学活性,以中和反应测定其特异性.将20只CBL/6小鼠随机分成2组,每只鼠肌内注射0.1mlLewis肺癌瘤细胞(10个/ml),待瘤长至约3.0mm时接种质粒.pcTNF-α组,瘤内注射pcTNF-α50μg,对照组,瘤内注

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