构建一个鼠源性的抗内毒素单链噬菌体抗体库，从中筛选出对内毒素具有较高亲和力的单链抗体。方法从小鼠脾细胞中提取总RNA，通过RT-PCR技术扩增出小鼠抗体重链、轻链可变区基因（VH，VL），用Linker将VH，VL交联形成单链抗体可变区片段（ScFv）。经NotⅠ，SfiⅠ双酶切后与经同样双酶切的pCANTAB5E载体相连，转化入大肠杆菌TG1以构建鼠抗内毒素单链噬菌体抗体库。在援救噬菌体抗体库后，用内毒素淘筛特异性的ScFv，富集的噬菌体阳性克隆重新感染TG1。在96孔板分别援救单个含特异性ScFv的TG1菌落，最后随机挑选出190个菌落经ELISA检测抗内毒素ScFv。结果小鼠血清中抗内毒素的效价为1∶12800。提取的总RNA浓度为12.3813μg/ml，纯度较好。扩增出的VH长约340bp，VL约320bp，ScFv约800bp。转化入TG1后有约1.9×107个菌落。淘筛一轮过后即有3×104阳性菌落长出，190个菌落经ELISA检测有2个阳性克隆。结论成功地构建了一个库容量为1.9×107的鼠抗内毒素单链噬菌体抗体库，并从中筛选出了2株抗内毒素ScFv。

国家自然科学基金资助项目（39570042）