构建缺氧诱导的AFP基因启动子（HRE-AFPp）调控的基因表达载体，并检测该调控元件的特异性和对缺氧诱导的反应性。方法：用PCR方法从人类基因组中扩增VEGF基因缺氧反应元件（HRE）和AFP基因启动子（AFPp），将上述片段与含有报告基因（强化绿色荧光蛋白基因）载体pEGFP-1的多克隆位点连接，构建成为缺氧诱导的AFP基因启动予调控的基因表达载体（pEGFP-[HRE]AFPp）。用脂质体法将表达载体转染表达或不表达AFP的细胞系，G418筛选阳性克隆，荧光显微镜观测重组AFPp的活性，并用流式细胞术检测缺氧诱导是否对其有调控作用。结果：成功地将HRE、AFPp克隆到报告基因载体pEGFP-1的多克隆位点，酶切鉴定和DNA序列分析无误，荧光显微镜观测证实EGFP能在AFP阳性肝癌细胞特异性表达，流式细胞术检测证实，16h缺氧诱导能增强EGFP的表达（P〈0．01）。结论：缺氧诱导的AFP顺式作用元件修饰的基因治疗载体，在基因转录水平特异性调控目的基因的表达，为下一步将其作为肝癌基因治疗载体奠定了基础。

国家自然科学基金（No.30400430）