目的： 构建靶向人角蛋白18（cytokeratin 18， CK18 ）基因的shRNA真核表达载体，稳定转染人乳腺癌MCF-7细胞株，观察其对MCF-7细胞增殖的影响。 方法： 设计两条靶向 CK18基因 的RNA干扰序列，命名为CK18-shRNA1、CK18-shRNA2，同时设计阴性对照，将合成的寡核苷酸链与Psilencer3.1-H1/Hygro质粒连接形成重组质粒，并经脂质体介导稳定转染MCF-7细胞，G418筛选后扩增获得稳定转染细胞株，分别采用RT-PCR和Western blotting法检测细胞株中 CK18 mRNA和蛋白的表达，并进一步通过MTT法检测重组表达载体稳定转染对细胞增殖的影响。 结果： 重组表达载体（Psilencer3.1-CK18-shRNA1、Psilencer3.1-CK18-shRNA2和Psilencer3.1-NC-shRNA）经PCR及DNA测序分析证明序列插入正确，经500 μg/ml G418筛选出稳定转染Psilencer3.1-CK18-shRNA的MCF-7细胞，Psilencer3.1-CK18-shRNA2转染可有效抑制MCF-7细胞中 CK18 mRNA和蛋白的表达，而Psilencer3.1-CK18-shRNA1转染不影响MCF-7细胞中 CK18 mRNA和蛋白的表达水平。与阴性对照Psilencer3.1-NC-shRNA组相比，Psilencer3.1-CK18-shRNA2转染可有效抑制MCF-7细胞的增殖\[（0.40±0.01） vs （0.55±0.06），P<0.05\]。 结论： 靶向 CK18 的shRNA表达载体稳定转染细胞后可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖。

国家杰出青年科学基金资助项目（No. 81202520）；山西医科大学青年基金资助项目（No. 02201103）