2010年第17卷第4期文章目次
2010, 17(4):363-367.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.001
摘要:
肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一，虽然其诊断和治疗有不少进展，但其预后仍较差，病死率较高。诱导分化治疗这一概念的提出为肝细胞癌的治疗指明了新的方向。诱导分化治疗在血液系统肿瘤治疗方面获得了成功，其经典范例是全反式维甲酸临床治疗急性早幼粒白血病；但是其在恶性实体肿瘤领域的进展远不如血液系统肿瘤。目前特异性的肝细胞癌诱导分化剂较少，相关的临床应用更是有限。靶向性地针对肿瘤干细胞分化相关的信号转导通路或转录因子进行干预可能起到诱导肝细胞癌分化的效果，例如通过上调与肝细胞分化密切相关的转录因子肝细胞核因子4α（hepatocyte nuclear factor 4α, HNF4α)来诱导肝癌细胞，特别是诱导肝癌干细胞向成熟阶段分化，已初见成效。肿瘤发生发展过程中存在诸多表观遗传学异常改变，如甲基化、乙酰化水平异常或microRNA表达异常，有些改变与肿瘤分化密切相关，干预这些异常改变的药物如组蛋白去乙酰化酶抑制剂对肿瘤起到一定的诱导分化作用。因此，肿瘤干细胞学说的出现及表现遗传学的发展给肝细胞癌诱导分化治疗研究提供了具体的途径。
肝细胞癌是最常见的恶性肿瘤之一，虽然其诊断和治疗有不少进展，但其预后仍较差，病死率较高。诱导分化治疗这一概念的提出为肝细胞癌的治疗指明了新的方向。诱导分化治疗在血液系统肿瘤治疗方面获得了成功，其经典范例是全反式维甲酸临床治疗急性早幼粒白血病；但是其在恶性实体肿瘤领域的进展远不如血液系统肿瘤。目前特异性的肝细胞癌诱导分化剂较少，相关的临床应用更是有限。靶向性地针对肿瘤干细胞分化相关的信号转导通路或转录因子进行干预可能起到诱导肝细胞癌分化的效果，例如通过上调与肝细胞分化密切相关的转录因子肝细胞核因子4α（hepatocyte nuclear factor 4α, HNF4α)来诱导肝癌细胞，特别是诱导肝癌干细胞向成熟阶段分化，已初见成效。肿瘤发生发展过程中存在诸多表观遗传学异常改变，如甲基化、乙酰化水平异常或microRNA表达异常，有些改变与肿瘤分化密切相关，干预这些异常改变的药物如组蛋白去乙酰化酶抑制剂对肿瘤起到一定的诱导分化作用。因此，肿瘤干细胞学说的出现及表现遗传学的发展给肝细胞癌诱导分化治疗研究提供了具体的途径。
2010, 17(4):368-373.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.002
摘要:
目的：应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱技术（surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry，SELDI-TOF-MS）比较乳腺癌曲妥珠单抗治疗耐药患者与非耐药患者血清蛋白质谱的差异，筛选预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的标志蛋白。方法：选择福建省肿瘤医院2008年1月至2009年10月曲妥珠单抗治疗的乳腺癌患者35例，以临床界定标准将患者分为耐药组（11例）和非耐药组（24例）。应用SELDI-TOF-MS技术检测两组患者外周血蛋白质表达谱的差异，以差异蛋白峰值比1.5为耐药的蛋白界定标准，以此标准判定患者耐药与否。分析该蛋白界定标准评判曲妥珠单抗耐药的灵敏度、特异度以及阳性预测值、阴性预测值。结果：以临床界定标准评判的曲妥珠单抗耐药的发生与患者年龄、分期、腋窝淋巴结转移和ER/PR双阴无关。临床耐药组和非耐药组患者外周血蛋白质表达谱比较显示，耐药患者的蛋白质峰7 971 Da、9 284 Da显著降低（P<0.05）。以蛋白界定标准评判患者曲妥单抗耐药与非耐药，7 971 Da评判时的灵敏度为81.82％（9/11）、特异度为83.33％（20/24）、阳性预测值为69.23％（9/13）、阴性预测值为90.91％（20/22）；以9 284 Da评判时的灵敏度为72.73％（8/11）、特异度为79.17％（19/24）、阳性预测值为61.54％（8/13）、阴性预测值为86.36％（19/22）。结论：应用SELDI-TOF-MS技术检测的差异蛋白质峰7 971 Da、9 284 Da似可作为预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的生物标志物。
目的：应用表面加强激光解析电离化飞行时间质谱技术（surface enhanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrometry，SELDI-TOF-MS）比较乳腺癌曲妥珠单抗治疗耐药患者与非耐药患者血清蛋白质谱的差异，筛选预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的标志蛋白。方法：选择福建省肿瘤医院2008年1月至2009年10月曲妥珠单抗治疗的乳腺癌患者35例，以临床界定标准将患者分为耐药组（11例）和非耐药组（24例）。应用SELDI-TOF-MS技术检测两组患者外周血蛋白质表达谱的差异，以差异蛋白峰值比1.5为耐药的蛋白界定标准，以此标准判定患者耐药与否。分析该蛋白界定标准评判曲妥珠单抗耐药的灵敏度、特异度以及阳性预测值、阴性预测值。结果：以临床界定标准评判的曲妥珠单抗耐药的发生与患者年龄、分期、腋窝淋巴结转移和ER/PR双阴无关。临床耐药组和非耐药组患者外周血蛋白质表达谱比较显示，耐药患者的蛋白质峰7 971 Da、9 284 Da显著降低（P<0.05）。以蛋白界定标准评判患者曲妥单抗耐药与非耐药，7 971 Da评判时的灵敏度为81.82％（9/11）、特异度为83.33％（20/24）、阳性预测值为69.23％（9/13）、阴性预测值为90.91％（20/22）；以9 284 Da评判时的灵敏度为72.73％（8/11）、特异度为79.17％（19/24）、阳性预测值为61.54％（8/13）、阴性预测值为86.36％（19/22）。结论：应用SELDI-TOF-MS技术检测的差异蛋白质峰7 971 Da、9 284 Da似可作为预测乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药的生物标志物。
2010, 17(4):374-380.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.003
摘要:
目的：研究TGF-β1对肺癌干细胞和非干细胞增殖的影响，为深入研究肺癌干细胞增殖与分化的分子调控机制奠定基础。方法：利用无血清培养基从人大细胞肺癌组织中分离、培养肿瘤细胞，并建立大细胞肺癌细胞系。以流式细胞术分选表达CD44和(或）CD90的肺癌细胞亚群，通过细胞球形成实验及X射线敏感实验鉴定分选的肺癌干细胞。用流式细胞术及细胞增殖抑制实验检测TGF-β1对肺癌干细胞生长的影响。结果：成功地培养出高纯度的原代大细胞肺癌细胞，其传代次数可达30代以上。应用CD44和CD90共同标记，可将大细胞肺癌细胞分为4亚群，分别是 CD44+CD90+、 CD44+CD90-、CD44++CD90+和CD44++CD90-细胞，其中CD44++CD90+细胞比例为0.4%。相比于其他细胞亚群，有较多的CD44++CD90+细胞为间质细胞样形态，它们形成细胞球的能力最强，对X射线照射的抵抗力也最强。TGF-β1能抑制肺癌细胞的增殖，并促使它们向间质细胞样形态转化。TGF-β1可抑制各亚群肺癌细胞的增殖，但对CD44++CD90+细胞的抑制能力最弱，而对CD44+CD90-细胞的抑制能力最强；培养体系中加入TGF-β1后CD44++CD90+细胞的比例逐步升高，去除TGF-β1后CD44++CD90+细胞的比例又逐渐降低。结论：CD44++CD90+细胞可能是大细胞肺癌的干细胞，TGF-β1能显著抑制肺癌非干细胞的增殖，从而相应地富集了肺癌干细胞。
目的：研究TGF-β1对肺癌干细胞和非干细胞增殖的影响，为深入研究肺癌干细胞增殖与分化的分子调控机制奠定基础。方法：利用无血清培养基从人大细胞肺癌组织中分离、培养肿瘤细胞，并建立大细胞肺癌细胞系。以流式细胞术分选表达CD44和(或）CD90的肺癌细胞亚群，通过细胞球形成实验及X射线敏感实验鉴定分选的肺癌干细胞。用流式细胞术及细胞增殖抑制实验检测TGF-β1对肺癌干细胞生长的影响。结果：成功地培养出高纯度的原代大细胞肺癌细胞，其传代次数可达30代以上。应用CD44和CD90共同标记，可将大细胞肺癌细胞分为4亚群，分别是 CD44+CD90+、 CD44+CD90-、CD44++CD90+和CD44++CD90-细胞，其中CD44++CD90+细胞比例为0.4%。相比于其他细胞亚群，有较多的CD44++CD90+细胞为间质细胞样形态，它们形成细胞球的能力最强，对X射线照射的抵抗力也最强。TGF-β1能抑制肺癌细胞的增殖，并促使它们向间质细胞样形态转化。TGF-β1可抑制各亚群肺癌细胞的增殖，但对CD44++CD90+细胞的抑制能力最弱，而对CD44+CD90-细胞的抑制能力最强；培养体系中加入TGF-β1后CD44++CD90+细胞的比例逐步升高，去除TGF-β1后CD44++CD90+细胞的比例又逐渐降低。结论：CD44++CD90+细胞可能是大细胞肺癌的干细胞，TGF-β1能显著抑制肺癌非干细胞的增殖，从而相应地富集了肺癌干细胞。
2010, 17(4):381-385.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.004
摘要:
目的：无血清培养基(serum-free medium, SFM)悬浮培养小鼠乳腺癌细胞株4T1，富集并鉴定4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞。方法：通过含EGF、bFGF和B27等细胞因子的SFM培养富集4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞，将其接种于含血清培养基（serum-supplemented medium, SSM)，观察4T1肿瘤干细胞样细胞分化情况。应用细胞表面标志CD44+CD24-/low和Hoechst 33342染色法检测4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的比例，小鼠致瘤实验验证不同培养条件下4T1肿瘤干细胞样细胞的致瘤能力。结果：4T1细胞在SFM中能够存活、增殖，并形成细胞球，细胞球可连续传代，若重新接种于SSM中可贴壁分化。4T1细胞球中CD44+CD24-/low细胞比例为6.4%~68.9%，侧群 (side population，SP) 细胞比例为7.3%~61.2%，均显著高于SSM中培养的4T1细胞（P<0.05）；随着SFM中细胞球传代次数增加，CD44+CD24-/low细胞和SP细胞的比例逐渐升高。小鼠致瘤实验结果显示，富集了肿瘤干细胞的细胞球比常规培养4T1细胞的致瘤性更强。结论：乳腺癌4T1细胞可在含多种生长因子的SFM中悬浮生长并形成细胞球，4T1细胞中含有的乳腺癌干细胞样细胞可通过SFM培养法富集。
目的：无血清培养基(serum-free medium, SFM)悬浮培养小鼠乳腺癌细胞株4T1，富集并鉴定4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞。方法：通过含EGF、bFGF和B27等细胞因子的SFM培养富集4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞，将其接种于含血清培养基（serum-supplemented medium, SSM)，观察4T1肿瘤干细胞样细胞分化情况。应用细胞表面标志CD44+CD24-/low和Hoechst 33342染色法检测4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的比例，小鼠致瘤实验验证不同培养条件下4T1肿瘤干细胞样细胞的致瘤能力。结果：4T1细胞在SFM中能够存活、增殖，并形成细胞球，细胞球可连续传代，若重新接种于SSM中可贴壁分化。4T1细胞球中CD44+CD24-/low细胞比例为6.4%~68.9%，侧群 (side population，SP) 细胞比例为7.3%~61.2%，均显著高于SSM中培养的4T1细胞（P<0.05）；随着SFM中细胞球传代次数增加，CD44+CD24-/low细胞和SP细胞的比例逐渐升高。小鼠致瘤实验结果显示，富集了肿瘤干细胞的细胞球比常规培养4T1细胞的致瘤性更强。结论：乳腺癌4T1细胞可在含多种生长因子的SFM中悬浮生长并形成细胞球，4T1细胞中含有的乳腺癌干细胞样细胞可通过SFM培养法富集。
2010, 17(4):386-391.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.005
摘要:
目的：构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒，制备MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白，研究该融合蛋白在肿瘤细胞内的定位及其对肿瘤细胞致凋亡作用。方法：PCR扩增MDA-7/IL-24基因，插入含有HaloTag (HT7)标签的载体中，构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒；MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白经IPTG诱导表达后纯化。利用带有荧光标记的HT7配基观察MDA-7/IL-24-HT7在肿瘤细胞内的定位。MTT法及AnnexinV-PI染色法检测MDA-7/IL-24-HT7对肿瘤细胞生长和凋亡的影响。结果：成功构建了表达MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的原核及真核表达质粒，MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白主要存在于E.coli BL21的包涵体内。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白定位于肿瘤细胞的内质网上。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞的生长，1 mg/ml MDA-7/IL-24-HT7 融合蛋白作用大肠癌HCT116细胞、肝癌SMMC7721细胞96 h后，细胞凋亡率分别为（34.7±1.3）% 和（22.1±0.9）%，显著高于未处理的肿瘤细胞（P<0.01）。结论：带有HaloTag标签的MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。
目的：构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒，制备MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白，研究该融合蛋白在肿瘤细胞内的定位及其对肿瘤细胞致凋亡作用。方法：PCR扩增MDA-7/IL-24基因，插入含有HaloTag (HT7)标签的载体中，构建MDA-7/IL-24-HT7原核及真核表达质粒；MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白经IPTG诱导表达后纯化。利用带有荧光标记的HT7配基观察MDA-7/IL-24-HT7在肿瘤细胞内的定位。MTT法及AnnexinV-PI染色法检测MDA-7/IL-24-HT7对肿瘤细胞生长和凋亡的影响。结果：成功构建了表达MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白的原核及真核表达质粒，MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白主要存在于E.coli BL21的包涵体内。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白定位于肿瘤细胞的内质网上。MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞的生长，1 mg/ml MDA-7/IL-24-HT7 融合蛋白作用大肠癌HCT116细胞、肝癌SMMC7721细胞96 h后，细胞凋亡率分别为（34.7±1.3）% 和（22.1±0.9）%，显著高于未处理的肿瘤细胞（P<0.01）。结论：带有HaloTag标签的MDA-7/IL-24-HT7融合蛋白可抑制肿瘤细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。
2010, 17(4):392-397.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.006
摘要:
目的：观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性小干扰RNA（mTOR-siRNA）干扰mTOR表达后，食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素(rapamycin)敏感性的变化。方法：mTOR-siRNA转染EC9706细胞， RT-PCR检测干扰效果。mTOR-siRNA转染前后的EC9706细胞用雷帕霉素处理，Western blotting检测EC9706细胞中mTOR及其下游p70S6K蛋白的表达；流式细胞术检测EC9706细胞的周期及凋亡，CCK-8试剂盒检测EC9706细胞的增殖。结果：mTOR-siRNA下调EC9706细胞中mTOR mRNA的表达（P<0.05或P<0.01)；雷帕霉素抑制EC9706细胞中mTOR和p-p70S6K蛋白的表达（P<0.05)，并促进p70S6K蛋白表达(P<0.01)，且mTOR-siRNA转染后此作用更明显（P<0.05）。雷帕霉素可诱导EC9706细胞凋亡(P<0.01)、抑制EC9706细胞增殖(P<0.05或P<0.01)、使EC9706细胞阻滞于G1期(P<0.01)，且mTOR-siRNA转染后这些作用更强（P<0.05）。结论：mTOR-siRNA能特异性下调食管鳞癌EC9706细胞中mTOR表达，提高EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性。
目的：观察哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR)特异性小干扰RNA（mTOR-siRNA）干扰mTOR表达后，食管鳞癌EC9706细胞对雷帕霉素(rapamycin)敏感性的变化。方法：mTOR-siRNA转染EC9706细胞， RT-PCR检测干扰效果。mTOR-siRNA转染前后的EC9706细胞用雷帕霉素处理，Western blotting检测EC9706细胞中mTOR及其下游p70S6K蛋白的表达；流式细胞术检测EC9706细胞的周期及凋亡，CCK-8试剂盒检测EC9706细胞的增殖。结果：mTOR-siRNA下调EC9706细胞中mTOR mRNA的表达（P<0.05或P<0.01)；雷帕霉素抑制EC9706细胞中mTOR和p-p70S6K蛋白的表达（P<0.05)，并促进p70S6K蛋白表达(P<0.01)，且mTOR-siRNA转染后此作用更明显（P<0.05）。雷帕霉素可诱导EC9706细胞凋亡(P<0.01)、抑制EC9706细胞增殖(P<0.05或P<0.01)、使EC9706细胞阻滞于G1期(P<0.01)，且mTOR-siRNA转染后这些作用更强（P<0.05）。结论：mTOR-siRNA能特异性下调食管鳞癌EC9706细胞中mTOR表达，提高EC9706细胞对雷帕霉素的敏感性。
2010, 17(4):398-402.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.007
摘要:
目的：制备CD80-链亲和素（streptavidin，SA）融合蛋白，研究CD80-SA锚定的鼻咽癌CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。方法：pET21a-CD80-SA-6His质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导CD80-SA融合蛋白的表达，经Ni-NTA亲和层析纯化后透析复性。流式细胞仪检测CD80-SA融合蛋白在CNE2细胞表面的锚定效率；LDH释放法检测CD80-SA锚定的CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。结果：成功制备和纯化了CD80-SA融合蛋白。CNE2细胞表面低表达CD80分子\[（2.2±0.18）％\]。CD80-SA融合蛋白可有效地锚定于生物素化的CEN2细胞表面，锚定效率可达73%。CD80-SA锚定的CNE2细胞可有效激活T细胞的杀伤作用，效靶比在1∶1、1∶20、1∶40时T细胞的杀伤率分别约为(37±3.12)%、(51±263)%和(58±2.47)%，均显著高于对照CNE2细胞激活的T细胞（均P<0.01)。结论：CD80-SA融合蛋白可有效锚定于生物素化的CNE2细胞表面，从而增强T细胞对CNE2细胞的杀伤活性。
目的：制备CD80-链亲和素（streptavidin，SA）融合蛋白，研究CD80-SA锚定的鼻咽癌CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。方法：pET21a-CD80-SA-6His质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导CD80-SA融合蛋白的表达，经Ni-NTA亲和层析纯化后透析复性。流式细胞仪检测CD80-SA融合蛋白在CNE2细胞表面的锚定效率；LDH释放法检测CD80-SA锚定的CNE2细胞对T细胞杀伤活性的影响。结果：成功制备和纯化了CD80-SA融合蛋白。CNE2细胞表面低表达CD80分子\[（2.2±0.18）％\]。CD80-SA融合蛋白可有效地锚定于生物素化的CEN2细胞表面，锚定效率可达73%。CD80-SA锚定的CNE2细胞可有效激活T细胞的杀伤作用，效靶比在1∶1、1∶20、1∶40时T细胞的杀伤率分别约为(37±3.12)%、(51±263)%和(58±2.47)%，均显著高于对照CNE2细胞激活的T细胞（均P<0.01)。结论：CD80-SA融合蛋白可有效锚定于生物素化的CNE2细胞表面，从而增强T细胞对CNE2细胞的杀伤活性。
2010, 17(4):403-407.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.008
摘要:
目的： 应用RNA干扰技术沉默肺癌A549细胞中 PIN1 （protein interacting with N1MA1）基因的表达，探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和裸鼠成瘤能力的影响。 方法: 构建靶向 PIN1 基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-PIN1和无义对照质粒pGPU6-GFP-Neo，以脂质体法转染A549细胞，G418筛选稳定沉默 PIN1 基因的细胞株。Real-time PCR和Western blotting验证 PIN1 基因在mRNA和蛋白水平的表达，MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和细胞周期分布。将稳定沉默 PIN1 的A549细胞与对照细胞皮下接种裸鼠，观察接种后肿瘤生长情况。 结果: 成功构建了pGPU6-GFP-Neo-PIN1载体，转染A549细胞并筛选获得稳定克隆。稳定转染pGPU6-GFP-Neo-PIN1的A549细胞中 PIN1 mRNA表达量较pGPU6-GFP-Neo转染组下降了893%；蛋白表达同时也显著抑制。 PIN1 基因沉默组的A549细胞增殖速率明显下降（P<0.01），细胞出现G1期阻滞。小鼠体内实验显示， PIN1 沉默的A549细胞在裸鼠体内成瘤能力降低（P<0.01)。结论: pGPU6-GFP-Neo-PIN1质粒稳定转染肺癌A549细胞能有效沉默 PIN1 基因的表达，从而抑制A549细胞的增殖、影响细胞周期和抑制成瘤能力。
目的： 应用RNA干扰技术沉默肺癌A549细胞中 PIN1 （protein interacting with N1MA1）基因的表达，探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和裸鼠成瘤能力的影响。 方法: 构建靶向 PIN1 基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-PIN1和无义对照质粒pGPU6-GFP-Neo，以脂质体法转染A549细胞，G418筛选稳定沉默 PIN1 基因的细胞株。Real-time PCR和Western blotting验证 PIN1 基因在mRNA和蛋白水平的表达，MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和细胞周期分布。将稳定沉默 PIN1 的A549细胞与对照细胞皮下接种裸鼠，观察接种后肿瘤生长情况。 结果: 成功构建了pGPU6-GFP-Neo-PIN1载体，转染A549细胞并筛选获得稳定克隆。稳定转染pGPU6-GFP-Neo-PIN1的A549细胞中 PIN1 mRNA表达量较pGPU6-GFP-Neo转染组下降了893%；蛋白表达同时也显著抑制。 PIN1 基因沉默组的A549细胞增殖速率明显下降（P<0.01），细胞出现G1期阻滞。小鼠体内实验显示， PIN1 沉默的A549细胞在裸鼠体内成瘤能力降低（P<0.01)。结论: pGPU6-GFP-Neo-PIN1质粒稳定转染肺癌A549细胞能有效沉默 PIN1 基因的表达，从而抑制A549细胞的增殖、影响细胞周期和抑制成瘤能力。
2010, 17(4):408-413.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.009
摘要:
目的：构建CXC趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4, CXCR4）RNA干扰真核表达载体，研究其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、黏附及迁移能力的抑制作用。方法：构建针对CXCR4的带发夹结构的小RNA干扰序列，并连接到pGCsi-U6-Neo-GFP载体中，转染293T细胞，筛选出干扰效率最高的表达载体。脂质体法转染MDA-MB-231细胞。利用CCK8法、细胞-基质黏附实验和划痕修复实验检测shRNA干扰CXCR4表达对MDA-MB-231细胞增殖、黏附和迁移能力的影响。结果：成功构建CXCR4-shRNA重组质粒，并转染293T细胞，利用RT-PCR及Western blotting检测发现CXCR4沉默效率最高可达81.3%。CXCR4-shRNA转染能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05)以及细胞与细胞外基质的黏附(P<005)。CXCR4-shRNA转染组MDA-MB-231细胞的迁移距离明显低于对照质粒组和空白对照组(P<0.01)。结论：CXCR4-shRNA干扰载体能特异性抑制CXCR4的表达，从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附及迁移。
目的：构建CXC趋化因子受体4（CXC chemokine receptor 4, CXCR4）RNA干扰真核表达载体，研究其对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、黏附及迁移能力的抑制作用。方法：构建针对CXCR4的带发夹结构的小RNA干扰序列，并连接到pGCsi-U6-Neo-GFP载体中，转染293T细胞，筛选出干扰效率最高的表达载体。脂质体法转染MDA-MB-231细胞。利用CCK8法、细胞-基质黏附实验和划痕修复实验检测shRNA干扰CXCR4表达对MDA-MB-231细胞增殖、黏附和迁移能力的影响。结果：成功构建CXCR4-shRNA重组质粒，并转染293T细胞，利用RT-PCR及Western blotting检测发现CXCR4沉默效率最高可达81.3%。CXCR4-shRNA转染能显著抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05)以及细胞与细胞外基质的黏附(P<005)。CXCR4-shRNA转染组MDA-MB-231细胞的迁移距离明显低于对照质粒组和空白对照组(P<0.01)。结论：CXCR4-shRNA干扰载体能特异性抑制CXCR4的表达，从而抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、黏附及迁移。
2010, 17(4):414-418.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.010
摘要:
目的： 研究小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）抑制Rac1b表达后对胃癌AGS细胞血管生成相关分子表达的影响。 方法： 体外合成针对 Rac1b 基因的siRNA序列（ Rac1b siRNA），脂质体法转染AGS细胞，RT-PCR和Western blotting观察 Rac1b siRNA 对AGS细胞 Rac1b mRNA和蛋白水平表达的影响，ELISA和Western blotting检测缺氧条件下转染 Rac1b siRNA后AGS细胞培养上清中VEGF表达水平以及细胞中血管生成相关分子P53、VHL和HIF-1α表达水平的变化。 结果： 测序证实体外合成的 Rac1b siRNA序列正确。 Rac1b siRNA转染AGS细胞后，可在mRNA和蛋白水平特异性抑制Rac1b的表达，对其同源分子Rac1的mRNA和蛋白表达水平无影响。 Rac1b siRNA可显著抑制AGS细胞培养上清中VEGF的分泌，这种抑制作用在缺氧情况下更为明显。同时， Rac1b siRNA在缺氧情况下可抑制AGS细胞内HIF-1α蛋白的表达、上调p53和VHL蛋白的表达。 结论： Rac1b siRNA可抑制胃癌AGS细胞中 Rac1b 在mRNA和蛋白水平的表达，可能通过调节血管生成相关分子HIF-1α、P53及VHL的表达抑制缺氧情况下AGS细胞VEGF的分泌。
目的： 研究小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）抑制Rac1b表达后对胃癌AGS细胞血管生成相关分子表达的影响。 方法： 体外合成针对 Rac1b 基因的siRNA序列（ Rac1b siRNA），脂质体法转染AGS细胞，RT-PCR和Western blotting观察 Rac1b siRNA 对AGS细胞 Rac1b mRNA和蛋白水平表达的影响，ELISA和Western blotting检测缺氧条件下转染 Rac1b siRNA后AGS细胞培养上清中VEGF表达水平以及细胞中血管生成相关分子P53、VHL和HIF-1α表达水平的变化。 结果： 测序证实体外合成的 Rac1b siRNA序列正确。 Rac1b siRNA转染AGS细胞后，可在mRNA和蛋白水平特异性抑制Rac1b的表达，对其同源分子Rac1的mRNA和蛋白表达水平无影响。 Rac1b siRNA可显著抑制AGS细胞培养上清中VEGF的分泌，这种抑制作用在缺氧情况下更为明显。同时， Rac1b siRNA在缺氧情况下可抑制AGS细胞内HIF-1α蛋白的表达、上调p53和VHL蛋白的表达。 结论： Rac1b siRNA可抑制胃癌AGS细胞中 Rac1b 在mRNA和蛋白水平的表达，可能通过调节血管生成相关分子HIF-1α、P53及VHL的表达抑制缺氧情况下AGS细胞VEGF的分泌。
2010, 17(4):419-423.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.011
摘要:
目的: 评价DC调节的细胞因子诱导的杀伤细胞（DC activated and cytokine induced killer cell，DCIK）联合化疗治疗晚期肺癌的疗效。 方法： 武警总医院2005年9月至2007年10月DCIK联合化疗的21例晚期肺癌患者作为联合治疗组，单纯化疗的20例晚期肺癌患者作为对照组。联合治疗组患者化疗前采集外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC），将PBMC体外培养制备DCIK。联合治疗组患者2周期全身化疗结束后回输DCIK，单纯化疗组仅进行2周期全身化疗，观察两组患者近期疗效、生活质量、免疫指标及生存率。 结果： 两组患者近期疗效相似，治疗有效率为42.9%和 40.0%，疾病控制率为66.7%和600%。联合治疗组KPS评分较治疗前升高（P<0.05），单纯化疗组KPS评分较治疗前无改善（P>0.05）。联合治疗组患者外周血CD3+CD18+、CD3+CD56+细胞的比例大幅升高（P<0.01）；而单纯化疗组无明显变化（P>005）。联合治疗组1年和2年生存率均高于单纯化疗组（57.1％ vs 50.0％，P<0.05；28.6％ vs 15.0％，P<0.01）。 结论： DCIK联合化疗治疗晚期肺癌具有更好的疗效，其生活质量、免疫功能和生存率有一定的提高。
目的: 评价DC调节的细胞因子诱导的杀伤细胞（DC activated and cytokine induced killer cell，DCIK）联合化疗治疗晚期肺癌的疗效。 方法： 武警总医院2005年9月至2007年10月DCIK联合化疗的21例晚期肺癌患者作为联合治疗组，单纯化疗的20例晚期肺癌患者作为对照组。联合治疗组患者化疗前采集外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC），将PBMC体外培养制备DCIK。联合治疗组患者2周期全身化疗结束后回输DCIK，单纯化疗组仅进行2周期全身化疗，观察两组患者近期疗效、生活质量、免疫指标及生存率。 结果： 两组患者近期疗效相似，治疗有效率为42.9%和 40.0%，疾病控制率为66.7%和600%。联合治疗组KPS评分较治疗前升高（P<0.05），单纯化疗组KPS评分较治疗前无改善（P>0.05）。联合治疗组患者外周血CD3+CD18+、CD3+CD56+细胞的比例大幅升高（P<0.01）；而单纯化疗组无明显变化（P>005）。联合治疗组1年和2年生存率均高于单纯化疗组（57.1％ vs 50.0％，P<0.05；28.6％ vs 15.0％，P<0.01）。 结论： DCIK联合化疗治疗晚期肺癌具有更好的疗效，其生活质量、免疫功能和生存率有一定的提高。
2010, 17(4):424-428.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.012
摘要:
目的： 探讨植物血凝素（PHA）、抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb）和rhIL-2共同诱导的PHA-CD3AK(PHA-CD3McAb actinated killer cell)细胞的临床应用质量控制，及其对恶性肿瘤的疗效。 方法： 选取陕西省友谊医院肿瘤生物诊疗科 53例中晚期肿瘤患者(宫颈癌9例，肺癌6例，肾癌6例，非霍奇金淋巴瘤5例，肝癌5例，胃癌7例，食道癌5例，恶性黑素瘤5例，直肠癌5例)，分离患者外周血单个核细胞，加入PHA、anti-CD3McAb、rhIL-2体外诱导制备自体 PHA-CD3AK细胞。质量控制检测细胞数量和活细胞比例、细胞毒活性、内毒素和感染源，流式细胞术检测免疫表型。将检测合格的自体PHA-CD3AK细胞静脉回输至患者体内，每 2 d 回输 1 次，每疗程6 次，共2个疗程，观察治疗效果和不良反应。 结果: 制备的 PHA-CD3AK细胞符合预期免疫活性细胞质控的各项要求。治疗后患者外周血CD3+、CD4+、CD8+ T 细胞和 CD16+56+细胞（NK 细胞）比例分别为（49.36 ± 9.21）%、（34.85 ± 4.35）%、（29.20± 5.12）%和（21.15± 6.50）%，较治疗前均显著升高（均 P<0.05）。大部分患者治疗后全身症状明显改善（43/53），其中完全缓解 6 例、部分缓解14 例、微效10 例、稳定14 例、进展9例，总有效率达566%，临床受益率达83.0%。所有患者治疗后相关化验指标均未出现异常变化，也未出现明显的全身毒性反应。 结论： PHA-CD3AK细胞制剂质量控制指标切实可行，其对恶性肿瘤的疗效确切，并能有效提高患者的免疫功能。
目的： 探讨植物血凝素（PHA）、抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb）和rhIL-2共同诱导的PHA-CD3AK(PHA-CD3McAb actinated killer cell)细胞的临床应用质量控制，及其对恶性肿瘤的疗效。 方法： 选取陕西省友谊医院肿瘤生物诊疗科 53例中晚期肿瘤患者(宫颈癌9例，肺癌6例，肾癌6例，非霍奇金淋巴瘤5例，肝癌5例，胃癌7例，食道癌5例，恶性黑素瘤5例，直肠癌5例)，分离患者外周血单个核细胞，加入PHA、anti-CD3McAb、rhIL-2体外诱导制备自体 PHA-CD3AK细胞。质量控制检测细胞数量和活细胞比例、细胞毒活性、内毒素和感染源，流式细胞术检测免疫表型。将检测合格的自体PHA-CD3AK细胞静脉回输至患者体内，每 2 d 回输 1 次，每疗程6 次，共2个疗程，观察治疗效果和不良反应。 结果: 制备的 PHA-CD3AK细胞符合预期免疫活性细胞质控的各项要求。治疗后患者外周血CD3+、CD4+、CD8+ T 细胞和 CD16+56+细胞（NK 细胞）比例分别为（49.36 ± 9.21）%、（34.85 ± 4.35）%、（29.20± 5.12）%和（21.15± 6.50）%，较治疗前均显著升高（均 P<0.05）。大部分患者治疗后全身症状明显改善（43/53），其中完全缓解 6 例、部分缓解14 例、微效10 例、稳定14 例、进展9例，总有效率达566%，临床受益率达83.0%。所有患者治疗后相关化验指标均未出现异常变化，也未出现明显的全身毒性反应。 结论： PHA-CD3AK细胞制剂质量控制指标切实可行，其对恶性肿瘤的疗效确切，并能有效提高患者的免疫功能。
2010, 17(4):429-433.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.013
摘要:
目的： 探讨带有甘露糖敏感血凝菌毛的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa with mannose sensitive hemagglutination pili，PA-MSHA）疫苗处理后急性髓细胞白血病源性树突状细胞（dendritic cells derived from acute myeloid leukemia，AML-DC）对调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）的抑制作用。 方法： rhGM-CSF和rhII-4诱导的AML-DC分为对照组、PA-MSHA组和TNF-α组，培养24 h后观察3组AML-DC的形态、流式细胞术检测各组AML-DC的表型、MTT法和混合淋巴细胞反应检测AML-DC对淋巴细胞增殖的作用。磁珠法分离健康人外周血CD4+T细胞，加入各组AML-DC中诱导Treg，ELISA法检测各组Treg上清液中IL-10、TGF-β的水平，流式细胞术检测Treg表面CD4、CD25的表达，RT-PCR法检测Treg中Foxp3 mRNA的表达水平。 结果： PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC呈树突状形态，且CDla、CD80、CD83、CD86和 HLA-DR表达较对照组明显升高（P<0.05）。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导的T细胞增殖能力显著增强（P<0.05）。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导产生的Treg分泌较低水平的IL-10、TGF-β（P<0.05），CD4、CD25的表达及Foxp3 mRNA水平均较对照组明显降低（P<0.05）。上述各指标PA-MSHA组和TNF-α组间均无明显差异。 结论： PA-MSHA疫苗可促进AML-DC的成熟，抑制初始T细胞向Treg的分化，增强AML-DC对AML患者Treg的抑制作用。
目的： 探讨带有甘露糖敏感血凝菌毛的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa with mannose sensitive hemagglutination pili，PA-MSHA）疫苗处理后急性髓细胞白血病源性树突状细胞（dendritic cells derived from acute myeloid leukemia，AML-DC）对调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）的抑制作用。 方法： rhGM-CSF和rhII-4诱导的AML-DC分为对照组、PA-MSHA组和TNF-α组，培养24 h后观察3组AML-DC的形态、流式细胞术检测各组AML-DC的表型、MTT法和混合淋巴细胞反应检测AML-DC对淋巴细胞增殖的作用。磁珠法分离健康人外周血CD4+T细胞，加入各组AML-DC中诱导Treg，ELISA法检测各组Treg上清液中IL-10、TGF-β的水平，流式细胞术检测Treg表面CD4、CD25的表达，RT-PCR法检测Treg中Foxp3 mRNA的表达水平。 结果： PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC呈树突状形态，且CDla、CD80、CD83、CD86和 HLA-DR表达较对照组明显升高（P<0.05）。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导的T细胞增殖能力显著增强（P<0.05）。PA-MSHA组和TNF-α组AML-DC诱导产生的Treg分泌较低水平的IL-10、TGF-β（P<0.05），CD4、CD25的表达及Foxp3 mRNA水平均较对照组明显降低（P<0.05）。上述各指标PA-MSHA组和TNF-α组间均无明显差异。 结论： PA-MSHA疫苗可促进AML-DC的成熟，抑制初始T细胞向Treg的分化，增强AML-DC对AML患者Treg的抑制作用。
2010, 17(4):434-438.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.014
摘要:
目的： 研究香菇多糖（lentinan， LNT）对急性髓细胞性白血病（acute myeloid leukemia, AML）患者树突状细胞（dendritic cell，DC）成熟及功能的影响，探索白血病免疫治疗的新途径。 方法： 分离AML完全缓解期患者（AML-complete remission，AML-CR）的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cell，BMC），用GM-CSF和IL-4诱导7 d培养DC，然后分组：LPS阳性对照组、LNT实验组和对照组。培养48 h后以瑞氏－吉姆萨(Wright-Giemsa)染色观察各组DC形态，流式细胞术检测各组DC表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a和HLA-DR的表达，ELISA法检测各组DC上清液中IL-12的水平。免疫磁珠法分离AML-CR患者经LNT治疗后的外周血DC，ELISA法检测治疗后DC上清液中IL-12的水平。 结果： 体外实验中，LNT处理后DC呈典型树突状形态；其表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a及HLA-DR的表达上调（P<0.05）；DC分泌IL-12较阴性对照组显著增高（P<0.05），且呈LNT浓度依赖性。患者体内试验结果显示，LNT治疗后AML患者的DC上清液中IL-12分泌水平较治疗前显著提高（P<0.05）。 结论： LNT在体内外均能促进AML患者的DC成熟和增强DC功能。
目的： 研究香菇多糖（lentinan， LNT）对急性髓细胞性白血病（acute myeloid leukemia, AML）患者树突状细胞（dendritic cell，DC）成熟及功能的影响，探索白血病免疫治疗的新途径。 方法： 分离AML完全缓解期患者（AML-complete remission，AML-CR）的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cell，BMC），用GM-CSF和IL-4诱导7 d培养DC，然后分组：LPS阳性对照组、LNT实验组和对照组。培养48 h后以瑞氏－吉姆萨(Wright-Giemsa)染色观察各组DC形态，流式细胞术检测各组DC表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a和HLA-DR的表达，ELISA法检测各组DC上清液中IL-12的水平。免疫磁珠法分离AML-CR患者经LNT治疗后的外周血DC，ELISA法检测治疗后DC上清液中IL-12的水平。 结果： 体外实验中，LNT处理后DC呈典型树突状形态；其表面分子CD80、CD83、CD86、CD1a及HLA-DR的表达上调（P<0.05）；DC分泌IL-12较阴性对照组显著增高（P<0.05），且呈LNT浓度依赖性。患者体内试验结果显示，LNT治疗后AML患者的DC上清液中IL-12分泌水平较治疗前显著提高（P<0.05）。 结论： LNT在体内外均能促进AML患者的DC成熟和增强DC功能。
2010, 17(4):439-443.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.015
摘要:
目的： 研究骨桥蛋白（osteopontin，OPN）在乳腺癌各分子亚型中的表达及其临床意义。 方法： 收集2000年1月至2003年12 月第二军医大学长海医院的99例乳腺癌组织标本，免疫组织化学法检测ER（estrogen receptor）、PR(progesterone receptor)和HER-2（human epidermal growth factor receptor-2）的表达，并据此将乳腺癌患者分为luminal A型、luminal B型、HER-2过表达型和基底细胞样型。免疫组织化学法测定各分子亚型乳腺癌组织中OPN的表达情况，并分析OPN表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。 结果： 根据ER、PR和HER-2的不同表达情况，99例乳腺癌患者中luminal A型45例、luminal B型27例、HER-2过表达型14例、基底细胞样型13例。OPN在luminal A型、luminal B型、HER-2过表达型和基底细胞样型中表达率分别为22.2%、29.6%、71.4%和61.5%，HER-2过表达型和基底细胞样型乳腺癌组织中OPN表达率均高于luminal A型和luminal B型（P<0.01）。OPN低表达的乳腺癌患者生存率高于OPN高表达者，两者差异有统计学意义（P<0.01）。 结论： OPN在基底细胞样型和HER-2过表达型乳腺癌组织中高表达，其表达可作为乳腺癌预后的评估指标之一。
目的： 研究骨桥蛋白（osteopontin，OPN）在乳腺癌各分子亚型中的表达及其临床意义。 方法： 收集2000年1月至2003年12 月第二军医大学长海医院的99例乳腺癌组织标本，免疫组织化学法检测ER（estrogen receptor）、PR(progesterone receptor)和HER-2（human epidermal growth factor receptor-2）的表达，并据此将乳腺癌患者分为luminal A型、luminal B型、HER-2过表达型和基底细胞样型。免疫组织化学法测定各分子亚型乳腺癌组织中OPN的表达情况，并分析OPN表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系。 结果： 根据ER、PR和HER-2的不同表达情况，99例乳腺癌患者中luminal A型45例、luminal B型27例、HER-2过表达型14例、基底细胞样型13例。OPN在luminal A型、luminal B型、HER-2过表达型和基底细胞样型中表达率分别为22.2%、29.6%、71.4%和61.5%，HER-2过表达型和基底细胞样型乳腺癌组织中OPN表达率均高于luminal A型和luminal B型（P<0.01）。OPN低表达的乳腺癌患者生存率高于OPN高表达者，两者差异有统计学意义（P<0.01）。 结论： OPN在基底细胞样型和HER-2过表达型乳腺癌组织中高表达，其表达可作为乳腺癌预后的评估指标之一。
2010, 17(4):444-449.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.016
摘要:
目的： 检测结直肠癌组织中Ras相关区域家族1A（ras-association domain family 1A, RASSF1A )基因启动子甲基化以及Cyclin D1和P53蛋白的表达，分析它们与结直肠癌临床病理特征的关系。 方法： 收集2008年8月至2009年8月长海医院病理科37例结直肠癌组织和14例癌旁组织(癌灶边缘5 cm以外组织）标本。甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR，MSP）检测结直肠癌组织中 RASSF1A 基因启动子的甲基化，免疫组织化学法检测结直肠癌组织中 Cyclin D1和P53蛋白的表达，分析 RASSF1A 启动子甲基化、Cyclin D1和P53表达的关联性以及三者与结直肠癌临床病理特征的相关性。 结果： 37例结直肠癌组织中 RASSF1A 启动子甲基化有23例（62.16%），14例癌旁组织中 RASSF1A 启动子甲基化有12例（85.71%）；37例癌组织中Cyclin D1阳性14例（37.84%）、P53阳性15例（40.54%），14例癌旁组织中Cyclin D1和p53表达均为阴性。直肠癌组织中 RASSF1A 启动子甲基化阳性率高于结肠癌（P<0.05）。结直肠癌患者年龄与Cyclin D1表达呈负相关（P<005），淋巴结转移与P53表达呈正相关（P<0.05）。结直肠癌组织中 RASSF1A 启动子甲基化与Cyclin D1和P53的表达无相关性。 结论： RASSF1A 启动子甲基化、Cyclin D1和P53蛋白表达三者的联合检测对研究结直肠癌的发生、发展有一定意义。
目的： 检测结直肠癌组织中Ras相关区域家族1A（ras-association domain family 1A, RASSF1A )基因启动子甲基化以及Cyclin D1和P53蛋白的表达，分析它们与结直肠癌临床病理特征的关系。 方法： 收集2008年8月至2009年8月长海医院病理科37例结直肠癌组织和14例癌旁组织(癌灶边缘5 cm以外组织）标本。甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR，MSP）检测结直肠癌组织中 RASSF1A 基因启动子的甲基化，免疫组织化学法检测结直肠癌组织中 Cyclin D1和P53蛋白的表达，分析 RASSF1A 启动子甲基化、Cyclin D1和P53表达的关联性以及三者与结直肠癌临床病理特征的相关性。 结果： 37例结直肠癌组织中 RASSF1A 启动子甲基化有23例（62.16%），14例癌旁组织中 RASSF1A 启动子甲基化有12例（85.71%）；37例癌组织中Cyclin D1阳性14例（37.84%）、P53阳性15例（40.54%），14例癌旁组织中Cyclin D1和p53表达均为阴性。直肠癌组织中 RASSF1A 启动子甲基化阳性率高于结肠癌（P<0.05）。结直肠癌患者年龄与Cyclin D1表达呈负相关（P<005），淋巴结转移与P53表达呈正相关（P<0.05）。结直肠癌组织中 RASSF1A 启动子甲基化与Cyclin D1和P53的表达无相关性。 结论： RASSF1A 启动子甲基化、Cyclin D1和P53蛋白表达三者的联合检测对研究结直肠癌的发生、发展有一定意义。
2010, 17(4):450-454.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.017
摘要:
目的： 探讨原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中免疫细胞的浸润及分布情况。 方法： 采用免疫组化S-P法，检测采集自福建省肿瘤医院30例HCC癌组织、癌周组织（距肿瘤边缘<2 cm）、非癌肝组织（距肿瘤边缘＞5 cm）石蜡标本中CD3、CD4、CD8、FoxP3、CD20、CD56、CD68的表达。 结果： 免疫组织化学结果显示，HCC患者CD3+、CD4+、FoxP3+细胞数在癌周组织中最高，癌组织中其次，非癌肝组织中最低（P<0.05）；CD8+、CD56+、CD68+细胞数在癌周组织中最高，非癌肝组织其次，癌组织中最低（P<005）；CD20+细胞数在肝癌组织、癌周组织、非癌肝组织中无明显差异（P>005）。肝癌组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD68+细胞主要分布于癌巢中的间质区，FoxP3+细胞呈散在分布。 结论: 肝癌组织局部微环境中，杀伤性免疫细胞减少，抑制性免疫细胞增加，从而导致局部免疫抑制状态。
目的： 探讨原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中免疫细胞的浸润及分布情况。 方法： 采用免疫组化S-P法，检测采集自福建省肿瘤医院30例HCC癌组织、癌周组织（距肿瘤边缘<2 cm）、非癌肝组织（距肿瘤边缘＞5 cm）石蜡标本中CD3、CD4、CD8、FoxP3、CD20、CD56、CD68的表达。 结果： 免疫组织化学结果显示，HCC患者CD3+、CD4+、FoxP3+细胞数在癌周组织中最高，癌组织中其次，非癌肝组织中最低（P<0.05）；CD8+、CD56+、CD68+细胞数在癌周组织中最高，非癌肝组织其次，癌组织中最低（P<005）；CD20+细胞数在肝癌组织、癌周组织、非癌肝组织中无明显差异（P>005）。肝癌组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD68+细胞主要分布于癌巢中的间质区，FoxP3+细胞呈散在分布。 结论: 肝癌组织局部微环境中，杀伤性免疫细胞减少，抑制性免疫细胞增加，从而导致局部免疫抑制状态。
2010, 17(4):455-457.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.018
摘要:
目的： 探讨间皮素（mesothelin,MSLN）siRNA慢病毒对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的治疗作用。 方法： 利用人卵巢癌SKOV3细胞建立卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型。实验分为3组：治疗组、阴性对照组和空白对照组。治疗组应用携间皮素siRNA慢病毒液(LV-MSLN-shRNA)对裸鼠模型进行治疗，阴性对照组采用空载体(LV-MSLN-neg)慢病毒液进行治疗，空白对照组注射PBS治疗。从裸鼠生长一般情况、成瘤率、体质量差、瘤体质量和肿瘤转移部位数等方面观察治疗效果， Western blotting法检测移植瘤组织中间皮素蛋白的表达情况。 结果： 用间皮素siRNA慢病毒液对荷瘤裸鼠进行注射的治疗组裸鼠的成瘤率、体质量差、瘤体质量及肿瘤形成部位数均明显低于空白对照组和空载体LV-MSLN-neg治疗组（P<0.01）。注射慢病毒液后瘤体组织中间皮素蛋白表达明显降低（P<0.05）。 结论： 间皮素siRNA慢病毒液对卵巢癌腹腔移植瘤的生长有显著抑制作用。
目的： 探讨间皮素（mesothelin,MSLN）siRNA慢病毒对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的治疗作用。 方法： 利用人卵巢癌SKOV3细胞建立卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型。实验分为3组：治疗组、阴性对照组和空白对照组。治疗组应用携间皮素siRNA慢病毒液(LV-MSLN-shRNA)对裸鼠模型进行治疗，阴性对照组采用空载体(LV-MSLN-neg)慢病毒液进行治疗，空白对照组注射PBS治疗。从裸鼠生长一般情况、成瘤率、体质量差、瘤体质量和肿瘤转移部位数等方面观察治疗效果， Western blotting法检测移植瘤组织中间皮素蛋白的表达情况。 结果： 用间皮素siRNA慢病毒液对荷瘤裸鼠进行注射的治疗组裸鼠的成瘤率、体质量差、瘤体质量及肿瘤形成部位数均明显低于空白对照组和空载体LV-MSLN-neg治疗组（P<0.01）。注射慢病毒液后瘤体组织中间皮素蛋白表达明显降低（P<0.05）。 结论： 间皮素siRNA慢病毒液对卵巢癌腹腔移植瘤的生长有显著抑制作用。
2010, 17(4):458-461.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.019
摘要:
目的： 比较针对锌指蛋白A 20 基因不同位点的siRNA对正常人DC成熟度的影响。 方法： 根据A 20 基因序列特点，针对 A20 C端的锌指结构-5区（zinc finger-5,Zif-5）、Zif-2和N端的序列分别设计合成了Si1、Si2和Si3三条siRNA，以脂质体法转染正常人DC，RT-PCR和Western blotting检测DC中 A20 mRNA和蛋白表达水平，流式细胞术检测DC的成熟度。 结果： 成功合成了3条siRNA。RT-PCR和Western blotting检测显示，DC中 A20 在 TNF-α刺激后24 h表达最高;Si1在DC中干扰效果最好,Si2其次。 A20 下调表达促进了DC的成熟。 结论： 针对 A20 锌指结构区域的siRNA能有效下调A20的表达，从而促进DC成熟。
目的： 比较针对锌指蛋白A 20 基因不同位点的siRNA对正常人DC成熟度的影响。 方法： 根据A 20 基因序列特点，针对 A20 C端的锌指结构-5区（zinc finger-5,Zif-5）、Zif-2和N端的序列分别设计合成了Si1、Si2和Si3三条siRNA，以脂质体法转染正常人DC，RT-PCR和Western blotting检测DC中 A20 mRNA和蛋白表达水平，流式细胞术检测DC的成熟度。 结果： 成功合成了3条siRNA。RT-PCR和Western blotting检测显示，DC中 A20 在 TNF-α刺激后24 h表达最高;Si1在DC中干扰效果最好,Si2其次。 A20 下调表达促进了DC的成熟。 结论： 针对 A20 锌指结构区域的siRNA能有效下调A20的表达，从而促进DC成熟。
20 抗肿瘤糖疫苗的研究进展
2010, 17(4):462-467.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.020
摘要:
肿瘤相关糖抗原（tumor-associated carbohydrate antigens, TACAs）是肿瘤表面重要的分子标记物，基于TACAs的肿瘤疫苗已成为肿瘤免疫治疗的热点。寻找合适的糖抗原与大分子载体连接，或者在免疫过程中添加免疫佐剂，是目前抗肿瘤糖疫苗设计的主要思路，如将TACAs与蛋白载体共价结合制备糖结合物疫苗，或与T细胞肽表位或免疫刺激表位连接制备多组分糖疫苗。从天然糖抗原疫苗，到半合成和全合成的糖抗原疫苗，抗肿瘤糖疫苗的发展十分迅速，并有一些疫苗进入了临床研究。近年来，联合应用TACAs类似物糖疫苗和肿瘤细胞糖质工程在肿瘤免疫治疗中也取得了可喜的结果，更多有效的TACAs相关肿瘤免疫策略也在积极研究中，相信在不久的将来会取得重大的突破。
肿瘤相关糖抗原（tumor-associated carbohydrate antigens, TACAs）是肿瘤表面重要的分子标记物，基于TACAs的肿瘤疫苗已成为肿瘤免疫治疗的热点。寻找合适的糖抗原与大分子载体连接，或者在免疫过程中添加免疫佐剂，是目前抗肿瘤糖疫苗设计的主要思路，如将TACAs与蛋白载体共价结合制备糖结合物疫苗，或与T细胞肽表位或免疫刺激表位连接制备多组分糖疫苗。从天然糖抗原疫苗，到半合成和全合成的糖抗原疫苗，抗肿瘤糖疫苗的发展十分迅速，并有一些疫苗进入了临床研究。近年来，联合应用TACAs类似物糖疫苗和肿瘤细胞糖质工程在肿瘤免疫治疗中也取得了可喜的结果，更多有效的TACAs相关肿瘤免疫策略也在积极研究中，相信在不久的将来会取得重大的突破。
2010, 17(4):468-472.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.021
摘要:
肿瘤血管生成在肿瘤发生发展中起重要作用。肿瘤血管生成是一个多因素调控的复杂过程，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在肿瘤血管生成中起核心作用。VEGF的表达受细胞遗传特性和肿瘤微环境中众多因素的影响，涉及转录、翻译和翻译后等多个环节，但通过转录因子对VEGF的转录进行调控是其最主要途径。本文阐述了与VEGF转录关系最密切的5个转录因子（Sp1、HIF-1、AP-1、Stat3和NF-κB），并对其与肿瘤的关系进行了分析。实际上这些转录因子的下游靶标除了VEGF外，还包括其他的血管生成促进因子（如PDGF、FGF）。因此，以这些转录因子为靶标的生物治疗可能是有效的肿瘤抗血管治疗策略。
肿瘤血管生成在肿瘤发生发展中起重要作用。肿瘤血管生成是一个多因素调控的复杂过程，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）在肿瘤血管生成中起核心作用。VEGF的表达受细胞遗传特性和肿瘤微环境中众多因素的影响，涉及转录、翻译和翻译后等多个环节，但通过转录因子对VEGF的转录进行调控是其最主要途径。本文阐述了与VEGF转录关系最密切的5个转录因子（Sp1、HIF-1、AP-1、Stat3和NF-κB），并对其与肿瘤的关系进行了分析。实际上这些转录因子的下游靶标除了VEGF外，还包括其他的血管生成促进因子（如PDGF、FGF）。因此，以这些转录因子为靶标的生物治疗可能是有效的肿瘤抗血管治疗策略。
22 eIF4E与肿瘤
2010, 17(4):473-477.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.022
摘要:
真核细胞翻译起始因子4E（eukaryotic translation initiation factor 4E，eIF4E）是与恶性肿瘤密切相关的因子之一，可与mRNA的5′端帽子结构特异性结合，在蛋白质合成的起始阶段发挥重要的调控作用。eIF4E的活性受自身磷酸化、翻译抑制蛋白的磷酸化及核内因子等因素的调节。eIF4E高表达于多种人类恶性肿瘤中，与肿瘤的发生、浸润和转移密切相关。目前已有一些以eIF4E为肿瘤治疗靶点的研究，如小分子干扰RNAs抑制eIF4E的表达、药物阻断AKT/mTOR或Raf/MEK/ERK信号通路、小分子抑制剂4EG1抑制帽依赖性翻译等，它们通过阻断eIF4E磷酸化抑制肿瘤细胞生长。总之，eIF4E有望成为恶性肿瘤生物治疗的新靶点。
真核细胞翻译起始因子4E（eukaryotic translation initiation factor 4E，eIF4E）是与恶性肿瘤密切相关的因子之一，可与mRNA的5′端帽子结构特异性结合，在蛋白质合成的起始阶段发挥重要的调控作用。eIF4E的活性受自身磷酸化、翻译抑制蛋白的磷酸化及核内因子等因素的调节。eIF4E高表达于多种人类恶性肿瘤中，与肿瘤的发生、浸润和转移密切相关。目前已有一些以eIF4E为肿瘤治疗靶点的研究，如小分子干扰RNAs抑制eIF4E的表达、药物阻断AKT/mTOR或Raf/MEK/ERK信号通路、小分子抑制剂4EG1抑制帽依赖性翻译等，它们通过阻断eIF4E磷酸化抑制肿瘤细胞生长。总之，eIF4E有望成为恶性肿瘤生物治疗的新靶点。
2010, 17(4):478-483.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.023
摘要:
晚期局部不可切除非小细胞肺癌的标准治疗是联合放化疗。然而部分患者难以耐受，且联合放化疗的疗效似乎已达“平台期”。表皮生长因子（epidermal growth factor receptor, EGFR）抑制剂可通过降低S期和提高G2/M期肿瘤细胞的比例、抑制EGFR转导通路中的多级磷酸化和抑制肿瘤细胞的增殖等途径，发挥对放疗的增敏作用。EGFR酪氨酸激酶抑制剂（如吉非替尼、厄洛替尼等）联合化放疗的初步临床研究显示出一定的疗效优势，但是在维持治疗中的作用尚不明确。西妥昔单抗与放化疗联合的临床研究提示患者中位生存期和2年生存率高于单纯放化疗，有必要进一步开展临床Ⅲ期随机试验。总之，EGFR抑制剂与放疗或放化疗的联合治疗晚期局部不可切除非小细胞肺癌具有一定的潜力，值得进一步深入研究。
晚期局部不可切除非小细胞肺癌的标准治疗是联合放化疗。然而部分患者难以耐受，且联合放化疗的疗效似乎已达“平台期”。表皮生长因子（epidermal growth factor receptor, EGFR）抑制剂可通过降低S期和提高G2/M期肿瘤细胞的比例、抑制EGFR转导通路中的多级磷酸化和抑制肿瘤细胞的增殖等途径，发挥对放疗的增敏作用。EGFR酪氨酸激酶抑制剂（如吉非替尼、厄洛替尼等）联合化放疗的初步临床研究显示出一定的疗效优势，但是在维持治疗中的作用尚不明确。西妥昔单抗与放化疗联合的临床研究提示患者中位生存期和2年生存率高于单纯放化疗，有必要进一步开展临床Ⅲ期随机试验。总之，EGFR抑制剂与放疗或放化疗的联合治疗晚期局部不可切除非小细胞肺癌具有一定的潜力，值得进一步深入研究。
2010, 17(4):484-485.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2010.4.024
摘要:
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- 《中国肿瘤生物治疗杂志》
- 1994年创刊
- 主办单位：中国免疫学会、中国抗癌学会
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