2013年第20卷第6期文章目次

张寒 , 郑胡镛

2013, 20(6):631-636. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.001

[摘要](2557) [HTML](0) [PDF 304.73 K](3015)

摘要:
选择性剪接（alternative splicing）是产生蛋白质组多样性的重要机制，并与肿瘤的发生、发展密切相关。丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1（serine/arginine-rich splicing factor 1，SRSF1）是选择性剪接因子家族的代表性成员，参与前体mRNA的选择性剪接与加工、胞内定位与运输等生理过程。研究已证实，SRSF1为原癌蛋白，并在肺癌、乳腺癌和白血病等人类肿瘤细胞中存在过表达现象。SRSF1蛋白通过与肿瘤相关基因的相互作用、调控细胞周期及凋亡等多种途径参与肿瘤的发生、发展过程。此外，SRSF1蛋白通过影响PI3K-Akt-mTOR、Ras-MNK-MAPK及Wnt-β-catenin信号转导通路中相关基因的剪接方式发挥致癌作用。针对剪接异常事件，目前主要采用反义寡核苷酸方法特异性纠正基因的错误性剪接，该方法已在肺癌及乳腺癌等实体肿瘤治疗中开展研究。深入研究选择性剪接的位点选择机制和作用机制必将对探讨肿瘤发病机制、诊断和治疗方法产生深远影响。

2 Ad5/F35-MAGE-A3的构建及其对黑素瘤患者DC成熟和凋亡的影响

张晓颖 , 徐晗 , 张斌 , 陈虎

2013, 20(6):637-644. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.002

[摘要](1729) [HTML](0) [PDF 2.20 M](2654)

摘要:
目的：构建含人黑素瘤相关抗原3（melanoma-associated antigen 3，MAGE-A3）的重组5/35型腺病毒（adenovirus serotype 5/35，Ad5/F35），观察腺病毒介导的MAGE-A3过表达对黑素瘤患者树突状细胞（dendritic cell，DC）的成熟和凋亡的影响。方法：选择转染效率最高的腺病毒载体，构建重组腺病毒载体并包装腺病毒颗粒Ad5/F35-MAGE-A3。免疫组化和Western blotting检测Ad5/F35-MAGE-A3感染对健康人、肾癌患者及黑素瘤患者DC中MAGE-A3表达的影响，流式细胞术检测Ad5/F35-MAGE-A3感染对黑素瘤患者DC成熟和凋亡的影响。结果：成功构建了含人MAGE-A3的重组腺病毒载体并包装腺病毒颗粒Ad5/F35-MAGE-A3，病毒感染滴度为7.94×108 IU/ml。Ad5/F35-MAGE-A3感染显著提高了健康人和肾癌患者DC中MAGE-A3的表达（P<0.05），不影响黑素瘤患者DC中MAGE-A3的表达\[（0.3352±0.1272）vs（0.4672±0.0704），P>0.05\]。Ad5/F35-MAGE-A3感染后黑素瘤患者DC共刺激分子CD80\[（20.42±0.58）% vs（10.22±1.04）%、（8.95±02）%\]、CD86\[（85.3±3.98）% vs（39.85±2.86）%、（34.1±4.32）%\]和HLA-DR\[（86.87±4.36）% vs（63.68±3.15）%、（60.69±4.81）%\]的表达明显高于阴性对照组和空白对照组（均P<0.05），但DC凋亡率无显著差异\[（1.18±0.09）% vs （1.09±0.11） %，P>0.05\]。结论：重组腺病毒载体Ad5/F35-MAGE-A3能够高效转染黑素瘤患者的DC，感染后不影响MAGE-A3在DC中的表达，能够促进DC的成熟，无明显细胞毒作用。

3 重组人血小板生成素治疗肿瘤患者化疗后血小板减少症的疗效和安全性：Ⅱ/Ⅲ期及补充多中心随机对照临床试验的汇总分析

吴全睿 , 赵永强 , 储大同 , 徐兵河 , 廖美琳 , 姜丽岩 , 徐建民 , 王华英 , 李进 , 侯梅 , 周清华 , 张力建 , 张树才 , 夏忠军 , 姜文奇 , 吕跃 , 翟明 , 孟凡义 , 王东星 , 王健民 , 陈正堂 , 关华军 , 王庆余 , 陈协群 , 刘基巍 , 张阳 , 宋善俊 , 刘文励 , 于世英 , 徐建明 , 宋恕平 , 徐健 , 李丽庆 , 张梅 , 孙红 , 江滨

2013, 20(6):645-653. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.003

[摘要](2702) [HTML](0) [PDF 290.98 K](3249)

摘要:
目的：汇总Ⅱ/Ⅲ期和补充多中心临床试验资料，评价重组人血小板生成素（recombinant human thrombopoietin, rh-TPO）治疗实体肿瘤患者化疗后血小板(platelet, PLT)减少症的临床疗效和安全性。方法：3个试验共入组受试者276例，其中Ⅱ期试验入组63例，Ⅲ期试验入组154例，补充临床试验入组59例；其后剔除5例、脱落41例，共有230例纳入符合方案（pre-protocol, PP）数据集；所有患者均经组织学或细胞学证实患有实体肿瘤。Ⅱ期临床试验和补充临床试验为随机交叉自身对照试验，Ⅲ期临床试验中受试者按是否参加随机交叉对照分为随机交叉自身对照试验部分和非随机交叉自身对照部分。将接受rh-TPO用药的试验周期定义为用药周期，未用rh-TPO的周期定义为空白对照周期，试验期间的化疗方案和剂量均维持不变。将所有临床试验数据合并并进行疗效和安全性分析。结果：意向性治疗人群（intention-to-treat, ITT）数据集及PP数据集均显示出非常显著的一致性变化（以ITT集数据为例）。与对照周期相比，rh-TPO治疗可显著减轻化疗对PLT损伤的程度\[化疗后PLT下降的最低值：（63.02±46.48）×109 vs（49.47±31.41）×109个/L，P=0.002\]，缩短损伤和恢复时间\[恢复至75×109个/L以上需要的天数: (11.18±9.71) vs (17.8±10.46) d，P=0.000\]，大幅提高血小板恢复水平\[末次随访时PLT检测值:（211.21±119.20）×109 vs （138.13±71.54）×109个/L，P=0.000；化疗后PLT最高值：（262.78±162.60）×109 vs （149.36±73.26）×109个/L，P=0.000；末次随访时PLT与基线的差值：（79.64±118.06）×109 vs （-892±102.50）×109个/L，P=0.000\]。rh-TPO还可降低PLT输注患者的比例（12.21% vs 19.85%，P=0.017），减少PLT输注例次（0.22±0.72） vs （0.37±0.90）次，P=0.010）和输注量\[（1.66±6.09） vs （2.77±7.08）U，P=0.009\]；补充试验中，PLT输注患者比例减少更为显著（1379% vs 33.93%，P=0.0082）。用药前后血红蛋白含量和白细胞计数变化、肝肾功能、凝血功能的差异均无统计学意义（P>0.05）。276例患者中仅出现11例次不良反应，多为发热（6例）或寒战（2例）。结论：实体肿瘤患者化疗后给予国产rh-TPO可显著减轻化疗对PLT的损伤程度，缩短损伤和恢复时间，大幅提高PLT水平，降低患者PLT输注的例次和数量，且无严重不良反应。

4 IL-2+IL-15组合培养方案对乳腺癌患者外周血中NK细胞体外扩增的效果

王晓梦 , 于津浦 , 李慧 , 于文文 , 任秀宝 , 曹水

2013, 20(6):654-660. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.004

[摘要](2507) [HTML](0) [PDF 993.46 K](3021)

摘要:
目的：观察IL-2+IL-15组合体外培养方案对于NK、NKT和T细胞亚群的比例、表型、杀伤肿瘤细胞活性与黏附活性的影响，并初步探讨其作用机制。方法：采集天津医科大学附属肿瘤医院生物治疗科2012年5月至2012年7月期间收治的5例乳腺癌患者的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），用IL-2+IL-15 联合培养方案进行培养，观察培养15 d后细胞的扩增倍数和淋巴细胞亚群比例变化，流式细胞术检测细胞免疫表型、细胞表面受体的表达，LDH释放法和CD107a释放法检测不同细胞亚群对于HLA匹配或不匹配的靶肿瘤细胞系的杀伤活性，活细胞工作站检测总扩增产物对于不同靶肿瘤细胞系的黏附作用。结果：与扩增前相比，IL-2+IL-15培养方案扩增15 d后，NK细胞\[（36.74±1710）% vs （16.34±3.12）%，P<0.05\]、NKT细胞\[（24.88±12.34）% vs （4.06± 2.05）%，P<0.05\]比例显著增加，CD4+ T细胞和Treg细胞比例显著降低（P<0.05），CD8+ T细胞比例显著升高（P<0.05）；NK细胞表面活化受体NKp30\[（ 92.38±7.19）% vs（32.14±17.64）%，P<0.05\]、NKp44\[（74.26±16.28）% vs（1.94±1.60）%，P＜0.05\]、NKG2D \[（ 98.58±128）% vs（6650±24.84）%，P<0.05\] 的表达率均显著升高，CD16表达率显著降低\[（ 85.12±7.66）% vs（95.60±253）%，P<0.05\]； NKT细胞、T细胞表面活化受体DNAM-1和NKG2D明显升高（P<0.05）。总扩增产物、NK细胞和NKT细胞对HLA不匹配的靶肿瘤细胞的杀伤率均显著高于HLA匹配靶细胞系的杀伤（P<0.05）；在共孵育至84 min时，与HLA匹配的靶肿瘤细胞系相比，总扩增产物细胞与HLA不匹配的靶细胞系黏附结合数目显著增多\[（ 4.80±0.53） vs （2.25±035）个，P<0.05\]。结论：IL-2+IL-15组合方案在扩增NK细胞的同时，也能够有效扩增NKT细胞，即可以扩增CD56+细胞群。并且，扩增产物主要以不受HLA限制的NK细胞杀伤活性为主来杀伤肿瘤细胞。

5 BCSC-1 过表达抑制肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移

田俊芳 , 邸大琳 , 王洪伟 , 巩方 , 郇雪洁 , 鞠吉雨

2013, 20(6):661-666. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.005

[摘要](2272) [HTML](0) [PDF 1.71 M](3074)

摘要:
目的：研究人乳腺癌候选抑癌蛋白1基因（breast cancer suppressor candidate 1，BCSC-1）过表达对肝癌Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移的影响，并探讨其可能的机制。方法：将pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1和空质粒pcDNA3.1/v5-HisB转染的Bel-7402细胞作为BCSC-1组和空载体组，Bel-7402细胞为野生型组。MTT法、Transwell实验、体外黏附实验和划痕实验分别检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞增殖、侵袭、黏附和迁移的影响，Real-time PCR检测BCSC-1过表达对Bel-7402细胞中与细胞增殖、黏附相关的 ICAM-1、PTTG、骨桥蛋白（osteopontin，OPN）mRNA表达的影响。结果：转染pcDNA3.1/v5-HisB-BCSC-1后Bel-7402细胞中 BCSC-1 mRNA的表达水平显著高于空载体组和野生组细胞\[（10.58±0.56）vs（1.10±022）、（1.00±0.01），均P＜0.01\]，成功制备 BCSC-1 稳定过表达的Bel-7402细胞株。与空载体组和野生型组相比， BCSC-1组Bel-7402细胞生长速度明显减慢\[72 h：（0.29±0.003） vs （0.34±0.014）、（0.35±0.013），均P<0.05\]；侵袭率\[（76.20±1.85）% vs（93.42±3.24）%、（100.00±1.05）%，均P<0.01）\]、黏附率\[（58.57±0.84）% vs（97.14±0.84）%、（100.00±130）%，均P<0.01\]显著降低，迁移距离显著降低\[（116.60±10.58） vs （231.33±10.26）、（237.96±11.58）μm，均P<001\]；同时过表达 BCSC-1的Bel-7402细胞的OPN mRNA表达量明显降低\[（0.12±0.06) vs (0.95±0.14）、（1.00±0.08），均P<001\]， ICAM-1、PTTG mRNA表达无明显变化。结论： BCSC-1过表达能够抑制Bel-7402细胞的增殖、侵袭、黏附和迁移能力，其机制可能与OPN基因表达下降有关。

6 慢病毒介导 EGFL7 沉默对肺癌A549细胞体外生物学行为的影响

沈笑春 , 黄建安

2013, 20(6):667-672. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.006

[摘要](1894) [HTML](0) [PDF 1.49 M](2816)

摘要:
目的：通过慢病毒介导沉默表皮生长因子样结构域7基因 (epidermal growth factor-like domain 7, EGFL7 )在肺癌A549细胞的表达，探讨 EGFL7对A549细胞的增殖、凋亡、侵袭和血管生成的影响。方法：利用慢病毒介导靶向 EGFL7的shRNA 转染A549细胞，实验分三组： LV-RNAi组（转染LV-RNAi），LV-NC组（转染空病毒）和对照组（A549细胞）。Real-time PCR和Western blotting分别检测LV-RNAi感染对A549细胞 EGFL7 mRNA和蛋白水平表达的影响，MTT法和流式细胞术分别检测沉默〖STBX〗EGFL7〖STBZ〗对A549细胞增殖和凋亡的影响，Transwell侵袭实验和鸡胚绒毛尿囊膜（chick embryo chorioallantoic membrane，CAM）实验分别检测沉默 EGFL7 对A549细胞侵袭和血管生成能力的影响。结果：慢病毒稳定高效地转染A549细胞，LV-RNAi组细胞内 EGFL7 mRNA\[（0.18±0.03） vs （0.98±0.05）、（1.03±0.09），P<0.05\]和蛋白表达较LV-NC组和对照组显著降低。与LV-NC组及对照组相比，沉默EGFL7 对LV-RNAi组A549细胞的增殖活力\[感染120 h 时：（073±0.22） vs （0.79±0.08） vs （0.81±0.11），P>0.05\]与和凋亡率\[感染120 h 时：（1.92%±0.06） vs （2.11%±0.07） vs （1.85%±0.13）, P>0.05\]均无显著影响；同时，LV-RNAi组A549细胞侵袭入下室细胞数\[（61.7±14.5） vs （272.8±215）、（286.6±40.0）/mm2，P<0.05\]与血管生成指数\[（31.7±4.1） vs （96.3±4.4）、（103.3±6.5），P<0.05\]均显著减少。结论：沉默 EGFL 基因能够抑制A549细胞侵袭和血管生成能力，但不影响其增殖与凋亡。

7 下调GnTⅣa表达对肝癌Hca-F细胞增殖及侵袭的影响

樊建慧 , 汪淑晶 , 于生金 , 何静娜 , 郑伟龙 , 张嘉宁

2013, 20(6):673-678. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.007

[摘要](1911) [HTML](0) [PDF 683.33 K](3081)

摘要:
目的：探讨慢病毒介导的N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅳa （N-acetylglucosaminyltransferase Ⅳa，GnTⅣa）表达下调对小鼠肝癌Hca-F细胞体外增殖及侵袭能力的影响。方法：针对GnTⅣa的编码基因Mgat4a，构建含shRNA干扰序列的慢病毒表达载体pll3.7/Mgat4a-shRNA并包装慢病毒颗粒，感染Hca-F细胞。RT-PCR 及流式细胞术分别检测Mgat4a-shRNA重组慢病毒感染对Hca-F细胞Mgat4a mRNA及GnTⅣa表达的影响，CCK-8法和Transwell侵袭实验分别检测Mgat4a-shRNA重组慢病毒感染在体外对Hca-F细胞增殖和侵袭能力的影响。结果：慢病毒能够高效感染小鼠肝癌细胞Hca-F，Mgat4a-shRNA组感染效率达72%。与Hca-F细胞和Mock-shRNA组相比，Mgat4a-shRNA组细胞内Mgat4amRNA\[（0.53±0.2） vs（2.97±02）、（2.90±0.1）；均P<0.05\]和GnTⅣa\[（47.80±2.25）vs（394.61±5.27）、（378.61±4.38）；均P<0.05\]表达显著降低；增殖能力\[细胞增殖抑制率：（46.9±0.02）%vs （0.82±0.03）%、 0，P<0.01\]和体外侵袭能力\[穿过滤膜的细胞数：（18±3）vs （42±4）、（38±3）个，均P<0.05\]显著下降。结论：慢病毒介导shRNA下调GnTⅣa的表达能够抑制小鼠肝癌细胞 Hca-F的增殖及体外侵袭。

8 小白菊内酯抑制CD34+ CD38- KG-1a白血病细胞的增殖并增强其被allo-NK细胞杀伤的敏感性

曹东林 , 李丽华 , 林茂锐 , 王婷 , 胡亮杉

2013, 20(6):679-684. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.008

[摘要](2093) [HTML](0) [PDF 761.26 K](2833)

摘要:
目的：探讨小白菊内酯（parthenolide，PTL）对CD34+CD38- KG-1a白血病细胞的增殖、Bcl-2表达及其被同种异体NK（allo-NK）细胞杀伤敏感性的影响。方法：免疫磁珠法从KG-1a细胞中分离CD34+CD38- KG-1a细胞。XTT法检测PTL对CD34+CD38-白血病细胞增殖的影响，Real-time PCR和Western blotting分别检测PTL对CD34+CD38- KG-1a细胞Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响，LDH释放法观察PTL对CD34+CD38- KG-1a细胞被allo-NK细胞杀伤敏感性的影响。结果：PTL对CD34+CD38- KG-1a细胞增殖的抑制呈剂量（2.5~80 μmol/L)依赖性。PTL浓度为2.5 μmol/L时，PTL组CD34+CD38- KG-1a细胞的增殖抑制率显著高于对照组\[（4.89±1.07）% vs 0，P<0.01\]；PTL杀伤CD34+CD38- KG-1a细胞的IC50为20 μmol/L；PTL组CD34+CD38-KG-1a细胞Bcl-2 mRNA \[（0.105±0.007）vs（0.307±0.013），P＜0.01\]与蛋白表达均显著低于对照组。在效靶比为10∶1，20∶1和40∶1时，allo-NK细胞对PTL组CD34+CD38- KG-1a细胞杀伤率逐步升高，且均高于阴性（无PTL处理）对照组\[(19.76±1.01)%，(30.14±0.96)%和(51.48±3.15)% vs (12.50±1.42)%，(16.90±0.93)%和(31.70±1.53)%（均P<0.01）\]；效靶比为40∶1时，allo-NK细胞对PTL组细胞的杀伤效率显著高于阳性（Bcl-2抑制剂ABT-737处理）对照组\[（51.48±3.15）% vs （43.08±2.81）%，P<0.05\]。结论：PTL能抑制CD34+CD38-KG-1a细胞的增殖并增强其被allo-NK细胞杀伤的敏感性，这可能与PTL下调Bcl-2的表达有关。

9 RNA干扰下调Slug表达对肺癌细胞A549的细胞周期、增殖和侵袭的影响

何巍 , 李玉霞 , 刘佳 , 李巍

2013, 20(6):685-689. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.009

[摘要](2185) [HTML](0) [PDF 425.92 K](3077)

摘要:
目的：应用RNA干扰技术下调肺癌A549细胞中Slug基因的表达，探讨其对A549细胞增殖、细胞周期和细胞侵袭能力的影响。方法：构建靶向Slug基因的shRNA真核表达质粒pGPU6-GFP-Neo-Slug，与阴性对照质粒pNeg-shRNA分别用脂质体法转染A549细胞。Real-time PCR和Western blotting验证转染后Slug mRNA和蛋白的表达。CCK-8法、流式细胞术和Transwell实验分别检测下调Slug表达对A549细胞增殖、细胞周期和侵袭能力的影响。结果：成功构建pGPU6-GFP-Neo-Slug载体并转染A549细胞，转染率达90%。与pNeg-shRNA组和空白对照组相比，pSlug-shRNA组A549细胞中Slug mRNA\[（0.23±0.01）vs（0.97±0.08）、（1.0±0.09），P＜0.05\]和蛋白\[（0.20±0.09 ）vs（1.0±0.32）、（1.13±0.26），P＜0.05\]表达量显著降低；细胞增殖抑制率明显上升\[（35.3±5.4）% vs（1.5±0.2）%、（3.3±0.7）%，均P< 0.01\]；细胞增殖指数显著降低 \[（32.92±0.69）% vs（48.19±0.71）%、（42.88±0.75）%，均P<0.05\]，并且处于G1期细胞数明显增多\[（67.08±092）% vs（52.81±0.78）%、（56.12±0.73）%，均P<0.05\]；细胞侵袭能力显著降低\[穿透基底膜细胞数：（55±9）vs（169±12）、（173±15），均P<0.01\]。结论: pGPU6-GFP-Neo-Slug转染肺癌A549细胞能有效下调Slug基因的表达，从而抑制A549的增殖侵袭能力、阻滞细胞周期于G1期。

10 肝癌Huh7干细胞样细胞的富集培养及鉴定

张涛 , 李东 , 漆仲春 , 彭晶晶 , 陈滔 , 谭勇 , 周进军 , 许涛 , 付曾强 , 刘煜 , 李华

2013, 20(6):690-695. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.010

[摘要](2605) [HTML](0) [PDF 2.02 M](3130)

摘要:
目的：建立一种体外有效富集、培养和鉴定具有肝癌干细胞特征的细胞亚群的方法。方法：采用成球培养法利用肿瘤干细胞样细胞（cancer stem cell, CSC）分化培养基对肝癌Huh7细胞进行富集培养，获得的干细胞样细胞于体外进一步扩增获得肝癌干细胞球。流式细胞术检测Huh7干细胞样细胞表面肿瘤干细胞标志物EpCAM、CD90和CD133的表达，平板克隆集落形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测Huh7细胞和Huh7干细胞样细胞的克隆集落形成能力、体内成瘤能力。结果：Huh7细胞成球培养3~7 d后即可形成肝癌干细胞样细胞球，获得的干细胞样细胞具有自我更新和增殖能力，其EpCAM阳性细胞比例较Huh7细胞明显增加\[（99.6%±0.31）% vs（0.12%±0.05）%，P<0.01\]，但两种细胞CD90\[(0.11%±0.06)% vs (0.09%±0.07)%, P>0.05\]和CD133\[(0.17%±0.08)% vs (0.15%±0.05)%， P>0.05]表达差异无统计学意义。Huh7干细胞样细胞克隆集落形成数量明显多于Huh7细胞\[（188.67±12.5）vs （79±16.7）个，P<0.01\]；当接种量为5×104个细胞时，与接种Huh7细胞的对照裸鼠相比，接种Huh7干细胞样细胞的裸鼠成瘤时间更短（11 vs 30 d），成瘤率更高（100% vs 16.67%）；接种5×105数量级的细胞时，实验组成瘤体积\[（171.90±10.94）vs（86.39±11.21）mm3, P<0.01\]和瘤体质量\[（2.98±0.82）vs（0.32±0.17）g, P<0.01\]均明显大于对照组。结论：利用成球培养法能够从Huh7肝癌细胞系中富集培养获得Huh7肝癌干细胞，其具有比Huh7细胞更强的成瘤能力。

11 寡克隆肝癌浸润淋巴细胞的制备及其对自体癌细胞的杀伤活性

张宗勤 , 陈磊 , 李鹏鹏 , 张小峰 , 孙斌 , 钱海华 , 施乐华 , 殷正丰

2013, 20(6):696-699. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.011

[摘要](1959) [HTML](0) [PDF 0.00 Byte](17)

摘要:
目的：建立一种新的寡克隆肝癌浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte，TIL）分离培养方法，获得具有更强自体肝癌细胞杀伤活性的TIL。方法：以新鲜切除的人肝癌组织标本为材料，分别采用酶消化结合整块肝癌组织机械处理的传统方法和微小肝癌组织块培养的方法分离制备常规TIL和寡克隆TIL，培养2周后，将靶细胞毒活性较高的寡克隆TIL合并进一步培养扩增，采用MTT法分析不同寡克隆TIL对自体肝癌细胞的杀伤活性，比较不同寡克隆TIL之间、常规TIL和寡克隆TIL对自体肝癌细胞的杀伤活性。结果：在含有IL-2的培养体系中，TIL可自行从微小肝癌组织块中逐渐浸润出来并增殖。各个寡克隆TIL对自体肝癌细胞均有一定的杀伤活性，但是不同寡克隆TIL对于自体肝癌细胞的细胞毒活性有明显差异（P＜0.01），寡克隆肝癌TIL对于自体肝癌细胞的细胞毒活性明显高于常规肝癌TIL\[（72.56±6.69）% vs （46.24±4.03）%，P<0.01\]。结论：寡克隆TIL分离培养方法制备的寡克隆肝癌TIL较常规TIL具有更强的自体肝癌细胞杀伤活性。

12 rSIFN-co对乳腺癌MCF-7/ADR细胞增殖、凋亡和表柔比星耐药性的影响

郑洁 , 吕青

2013, 20(6):700-705. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.012

[摘要](2893) [HTML](0) [PDF 515.59 K](3134)

摘要:
目的：观察重组复合高效干扰素（recombinant super-compound interferon，rSIFN-co）在体外对多药耐药（multi-drug resistance，MDR）的人乳腺癌MCF-7/ADR细胞的增殖、凋亡和表柔比星耐药性的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：分别使用rSIFN-co、表柔比星及rSIFN-co联合表柔比星处理MCF-7/ADR细胞，以MCF-7细胞作为对照，MTT法和流式细胞术分别检测rSIFN-co对MCF-7/ADR细胞增殖、凋亡的影响，免疫细胞化学方法检测rSIFN-co对MCF-7/ADR细胞中P-gp表达水平的影响。结果：各组药物作用24 h后，0.078 μg/ml rSIFN-co单独作用和0.02 μg/ml rsIFN-co联合15.00 μg/ml 表柔比星对MCF-7/ADR细胞体外生长的抑制率即显著高于100.00 g/ml的表柔比星\[（29.7±1.4）%、（23.0±2.1）% vs （17.1±15）%，均P<0.01\]，各组药物对MCF-7/ADR细胞的抑制率呈时间、浓度依赖性；rSIFN-co联合表柔比星作用72 h后表现出协同作用。表柔比星作用24 h后， MCF-7/ADR细胞凋亡率与对照组相比无显著变化（P>0.05）；而rSIFN-co单用或联合表柔比星作用24 h后，凋亡率即较单用表柔比星组显著增加\[（35.37±1.40）%、（61.37±1.76）% vs （9.80±1.66）%，均P<0.01\]，其促凋亡的作用呈时间依赖性；并且rSIFN-co与表柔比星具有协同作用。表柔比星组P-gp的表达较对照组显著升高\[（4.17±0.0252） vs （3.94±0.0088），P<0.01\]， rSIFN-co组与联合组P-gp的表达均显著下调\[（2.59±0.0260）、（2.62±00100）vs （3.94±0.0088），均P<0.01）；联合组与单用rSIFN-co相比无显著差异（P=0.948）。结论： rSIFN-co能够抑制MCF-7/ADR细胞增殖并促进其凋亡，同时可能通过下调P-gp蛋白的表达来增加其对表柔比星的敏感性。

13 shRNA下调BAG-1表达降低肺癌A549细胞对顺铂的耐药性

刘洋 , 刘志良 , 哈敏文 , 王亚帝

2013, 20(6):706-710. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.013

[摘要](1758) [HTML](0) [PDF 1.46 M](3124)

摘要:
目的：通过载体介导的shRNA下调BAG-1基因（Bcl-2 associated athanogene-1)表达，探讨其对肺癌A549细胞顺铂（cisplatin，DDP）耐药性的影响。方法：构建靶向BAG-1的shRNA干扰载体pGCsi-BAG-1，稳定转染A549细胞。实验组使用稳定转染pGCsi-BAG-1的细胞株（BAG-1-shRNA），阴性对照组使用无关序列质粒转染的细胞株（SC-shRNA），对照组使用未转染的亲本A549细胞株（Control）。Western blotting检测pGCsi-BAG-1转染对A549细胞BAG-1、Bcl-2表达的影响。MTT法、流式细胞术分别检测pGCsi-BAG-1转染对DDP处理后A549细胞的增殖和凋亡的影响。结果：成功构建稳定干扰BAG-1表达的A549细胞株，BAG-1-shRNA组细胞中BAG-1和Bcl-2蛋白表达显著低于SC-shRNA组和对照组（均P<0.05）。随DDP(25~40 μg/ml)浓度增加，各组细胞增殖抑制率也随之升高，DDP浓度为2.5 μg/ml时，BAG-1-shRNA组A549细胞的增殖抑制率即显著高于SC-shRNA组和对照组\[（22.26±4.89）% vs （10.07±3.82）%，（8.12±4.09）%，均P<0.05\]。与SC-shRNA组和对照组相比，DDP(2.5 μg/ml)处理24 h后，BAG-1-shRNA组凋亡率显著升高\[（37.8 4±3.62）％ vs （16.80±281）％、（17.10±3.11）％，P<0.05\]。结论：下调BAG-1表达可抑制DDP作用下的A549细胞的增殖并促进其凋亡。

14 自体DC-CIK细胞治疗晚期肾细胞癌的疗效

谭洁 , 王彬 , 何志洁 , 蔡俊霞 , 时建明 , 吴锦昌 , 时宏珍

2013, 20(6):711-716. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.014

[摘要](2685) [HTML](0) [PDF 374.85 K](3116)

摘要:
目的：探讨自体树突状细胞（dendritic cell，DC）激活的细胞因子诱导的杀伤（cytokine-induced killer，CIK）细胞在晚期肾细胞癌（renal cell carcinoma，RCC）治疗中的临床效果与安全性。方法：采集22例2011年7月至2012年6月期间南京医科大学附属苏州医院肿瘤内科收治的22例RCC Ⅳ期患者\[男性12例、女性10例，中位年龄60.8岁（21~79岁）\]外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），体外制备成DC-CIK细胞。流式细胞术分析DC-CIK细胞中CD3+T、CD8+T、CD4+T、NK（CD3-CD56+）和NKT（CD3+CD56+）细胞的比例，MTT法检测DC-CIK细胞对白血病K562细胞（对NK细胞敏感）和肾癌786-0细胞（对NK细胞不敏感）的杀伤活性。受试患者于常规治疗（手术+化疗+放疗/细胞因子治疗）结束后4周进行DC-CIK细胞治疗，每次静脉回输细胞数约（5.0±0.5）×108个，5次为1疗程，共3个疗程，分别于疗程开始前与结束后1周内监测患者外周免疫学指标（淋巴亚群、细胞因子谱），严密观察并记录治疗过程中的不良反应。结果：DC-CIK细胞组成为CD3+细胞占（86.92±5.32）%、CD3+CD8+CD56+（NKT细胞）占（52.04±7.33）%、CD8-CD56+（NK细胞）占（785±315）%，DC-CIK细胞对786-0细胞和K562细胞的体外杀伤率相仿（效靶比为3∶1时，杀伤率分别为（16.5±1.7）%和（18.4±1.9）%，P=0.014）。患者接受DC-CIK细胞治疗后，外周血淋巴细胞亚群（CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD3-CD56+NK细胞）比例无显著变化（P>0.05）；外周血中IL-2、IL-12和IFN-γ细胞因子水平较治疗前明显提升（均P＜0.05），而TNF-α 和IL-10变化不明显（均P＞0.05）。2例患者发生一过性发热，持续4~6 h恢复，1例出现短期乏力。结论：DC-CIK细胞体外能有效杀伤786-0细胞和K562细胞。输注后可提升部分RCC患者免疫水平，安全性良好，可作为晚期RCC患者辅助治疗之一。

15 食管鳞癌组织中 Gadd45G 基因家族的表达及其临床意义

何宏涛 , 李书梅 , 郭炜 , 邝钢 , 崔蕾 , 田国 , 董稚明

2013, 20(6):717-724. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.015

[摘要](2083) [HTML](0) [PDF 1.50 M](3116)

摘要:
目的：观察生长阻滞和DNA损伤诱导基因（growth arrest and DNA-damage-inducible 45, Gadd45 ）家族在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma, ESCC）中的表达，并探讨其临床意义。方法: 选取河北医科大学第四医院2004-2008年间食管鳞癌患者128例的癌组织和癌旁组织标本。RT-PCR检测 Gadd45家族Gadd45A、Gadd45B和Gadd45G mRNA在食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达，免疫组织化学方法检测Gadd45A、Gadd45B和Gadd45G蛋白在食管鳞癌组织及癌旁正常组织中的表达情况，分析 Gadd45A、Gadd45B和Gadd45G 表达与食管鳞状细胞癌的临床病理特征和预后之间的关系。结果: 与癌旁组织相比，食管鳞癌组织中 Gadd45A mRNA表达水平显著升高\[(0.8924±0.3457) vs (0.6123±0.2132)，P<0.05\]； Gadd45B mRNA表达水平没有显著变化\[(0.8256±0.3110) vs (0.8173±0.3069)，P>0.05\]； Gadd45G mRNA表达水平显著降低\[(0.3855±0.1210) vs (0.8214±0.3069)，P<0.05\]，癌组织中 Gadd45G mRNA表达与TNM 分期和组织学分化程度密切相关。Gadd45A在癌旁组织中的蛋白表达以细胞核着色为主，而在部分肿瘤组织中表现为细胞质表达模式。与癌旁组织相比，食管鳞癌组织中Gadd45A的表达显著升高（χ2=55.603，P=0.000）；Gadd45B的表达没有显著性差异（χ2=0.456，P=0500）；Gadd45G的表达显著降低（χ2= 70.134，P=0.000）。Ⅲ期和Ⅳ期食管鳞癌患者Gadd45G蛋白表达水平显著低于Ⅰ期和Ⅱ期患者（χ2=5.768，P=0.016），低分化组的Gadd45G蛋白阳性表达率显著低于中高分化组（χ2=4.483，P=0.034）。Gadd45G阳性患者的5年存活率明显高于阴性患者（44% vs 21%，P<0.05）；Cox模型分析显示，Gadd45G蛋白的表达是食管鳞癌患者的一个独立预后因素。结论: Gadd45A和Gadd45G 基因在食管鳞癌中的异常表达可能参与了食管鳞癌的发生、发展。

16 胃癌患者外周血干扰素水平的变化及其临床意义

郑雅文 , 赵华 , 魏枫 , 于津浦 , 李慧 , 张新伟 , 任秀宝

2013, 20(6):725-728. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.016

[摘要](1841) [HTML](0) [PDF 708.39 K](3066)

摘要:
目的：检测胃癌患者外周血各类干扰素（Interferon，IFN）水平，探讨其与临床病理特征的关系。方法：收集天津医科大学附属肿瘤医院胃部肿瘤科2012年3月至2012年5月收治的47例初治胃腺癌患者外周血，以同期收集的25例健康人外周血为对照，ELISA法检测血清中IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFN-λ1以及IFN-λ2/3含量，分析各类IFN含量与患者性别、年龄、肿瘤分化程度、原发部位及各项生化指标间的相关性。结果：与健康对照相比，IFN-β在Ⅰ、Ⅱ期胃癌中表达升高（P=0009），IFN-λ1在Ⅲ、Ⅳ期胃癌中表达下降（P<0.001），而IFN-γ和λ2/3在Ⅲ、Ⅳ期胃癌中表达升高（P=0.029；P=0.004）。IFN-α、β含量与肿瘤发生部位有密切关系（P=0.003；P=0.004）；IFN-γ与LDH水平密切相关（P=0.013）。结论：胃癌患者外周血中不同IFN亚型呈现不同的表达变化，其变化与胃癌发生部位、分期及LDH水平相关，提示IFN家族成员可能对肿瘤的发生发展发挥各自的作用。

17 DNA甲基化调控在免疫学研究中的进展

赵锴 , 曹雪涛

2013, 20(6):729-734. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.017

[摘要](2095) [HTML](0) [PDF 248.93 K](3916)

摘要:
表观遗传学是研究基因序列不发生改变的情况下，基因表达发生了可以遗传的改变的一门学科。DNA甲基化是表观遗传学中进化上比较保守、相对比较稳定的一种表观修饰。DNA甲基化，特别是CpG岛的高甲基化，通常能够介导基因表达的稳定沉默。研究表明，DNA甲基化参与调控免疫系统的分化发育，DNA甲基化的异常也是包括肿瘤在内的众多免疫相关疾病发生、发展的关键致病因素。表观遗传学与免疫学的碰撞也为理解免疫学现象的分子调控机制提供了崭新的视角。本文将对近年来DNA甲基化调控在免疫学中的进展作一综述。

18 线粒体融合素基因-2与肿瘤

周立艳 , 邱梅清 , 贾勇圣 , 佟仲生

2013, 20(6):735-738. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.018

[摘要](2065) [HTML](0) [PDF 211.16 K](2743)

摘要:
线粒体融合素基因-2（mitofusin-2 gene， Mfn-2 ）是作用于线粒体外膜的一种增殖抑制基因，在维持线粒体的形态、功能等方面起着重要作用。随着研究的不断深入， Mfn-2 在细胞信号转导、能量代谢、增殖及凋亡等生命过程中的作用日益显现。而肿瘤发生与细胞过度增殖及凋亡不足等密切相关，因此，如何抑制肿瘤细胞的过度增殖和促进细胞凋亡已成为目前的研究热点。 Mfn-2 通过多条通路参与多种肿瘤传代细胞系的增殖和凋亡，其表达异常或功能缺失可能是肿瘤发生、发展的重要原因。 Mfn-2 在许多肿瘤组织中低表达，且表达情况与肿瘤病理类型及生物学行为密切相关，提示其有可能是新的抑癌基因；同时， Mfn-2 过表达与喜树碱、放线菌酮（cycloheximide，CHX）等化疗药物联用具有协同作用，提示具有成为化疗增敏靶点的潜力。本文就 Mfn-2 的功能与肿瘤发生、发展的关系及其治疗学意义的相关研究进展进行综述。

19 P53蛋白介导mTOR信号途径影响肿瘤细胞自噬的研究进展

聂雪坤 , 曾莉莉 , 牛培广 , 史道华

2013, 20(6):739-743. DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2013.06.019

[摘要](2030) [HTML](0) [PDF 358.03 K](2797)

摘要:
自噬是机体内的一种代谢方式，参与调控多种生理病理过程，受不同信号级联反应调节，在维持细胞生长与代谢等方面起关键作用。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）是一种蛋白激酶，也是调节细胞生长和增殖的重要信号分子，其通路的异常激活与肿瘤的发生发展密切相关且可通过调节细胞自噬治疗肿瘤。 p53 为抑癌基因，具有抑制癌症形成的作用。近来研究显示，胞质和胞核中均存在P53蛋白，在核内P53可通过活化腺苷酸活化的蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase，AMPK）激活抑癌基因与张力蛋白同源10q丢失的磷酸酶基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten，PTEN）的转录等机制来调节mTOR信号通路相关分子，抑制mTOR活性，促使UNC-51激酶1（unc-51-like kinase1，ULK1）去磷酸化而增强自噬，亦可介导某些凋亡蛋白（Bcl-2、Bax等）及调控因子（DRAM、PUMA等）的信号通路参与自噬调节，但与mTOR通路的关系尚待研究；细胞质中的P53蛋白以非依赖转录的方式如降解P53、抑制RB1CC1/FIP200活性等，参与mTOR途径调控，抑制自噬。本文就P53蛋白介导mTOR信号途径影响肿瘤细胞自噬的研究进展作一综述。

微信公众号

网站二维码

2013年第20卷第6期文章目次

当期目录

年份

刊期