2018年第25卷第3期文章目次
2018, 25(3):213-220.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.001
摘要:
免疫检查点的研究在近几年实现突破性进展，PD-1/PD-L1信号通路与免疫逃逸机制密切相关，针对阻断PD-1/PD-L1 通路免疫检查点的治疗在肺癌中取得明显效果。从Checkmate-017、Checkmate-057研究到KEYNOTE-010研究和OAK研究，逐 步奠定了PD1/PD-L1抑制剂作为化疗失败晚期NSCLC的标准治疗的地位；PD-1/PD-L1抑制剂可联合其他治疗方式，包括放疗、 化疗、靶向治疗以及其他免疫治疗等方式，在肺癌综合治疗中起到协同作用，从而提高了疗效。免疫检查点抑制剂带来了肺癌治 疗模式的改变，也对肿瘤疗效评价模式、治疗相关不良反应的处理带来挑战。另外，免疫检查点抑制剂的研发也有力地推动了精 准医疗的进展。
免疫检查点的研究在近几年实现突破性进展，PD-1/PD-L1信号通路与免疫逃逸机制密切相关，针对阻断PD-1/PD-L1 通路免疫检查点的治疗在肺癌中取得明显效果。从Checkmate-017、Checkmate-057研究到KEYNOTE-010研究和OAK研究，逐 步奠定了PD1/PD-L1抑制剂作为化疗失败晚期NSCLC的标准治疗的地位；PD-1/PD-L1抑制剂可联合其他治疗方式，包括放疗、 化疗、靶向治疗以及其他免疫治疗等方式，在肺癌综合治疗中起到协同作用，从而提高了疗效。免疫检查点抑制剂带来了肺癌治 疗模式的改变，也对肿瘤疗效评价模式、治疗相关不良反应的处理带来挑战。另外，免疫检查点抑制剂的研发也有力地推动了精 准医疗的进展。
2018, 25(3):221-228.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.002
摘要:
目的： 探讨鞘氨醇激酶1 （sphigosine kinase 1, SphK1）基因下调对间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）诱导的 结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。 方法： 采用MSC条件培养液（MSC-CM）和对照培养液（Control-CM）分别干预RKO细胞， CCK-8法检测细胞的增殖能力，Transwell实验检测细胞的迁移能力，Western blotting法检测Ki-67抗原（Ki-67）、MMP-2/9、肿瘤干 细胞标志物CD44和CD133蛋白的表达。用慢病毒shRNA载体转染RKO细胞抑制SphK1的表达，观察抑制SphK1的表达对 MSC-CM诱导的RKO细胞增殖、迁移以及MMP-2/9、CD44和CD133蛋白表达的影响。 结果： MSC-CM可时间依赖性促进RKO 细胞的增殖(P<0.05)，并明显增强细胞的迁移能力(P<0.01)和细胞中Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达(均P<0.05或P< 0.01)。慢病毒shRNA转染明显抑制RKO细胞SphK1的表达，抑制SphK1的表达可显著抑制MSC-CM对RKO细胞增殖和迁移的 促进作用(均P<0.05或P<0.01)，且明显抑制MSC-CM诱导的Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达。 结论： MSC-CM可 促进RKO细胞的增殖和迁移，下调SphK1可通过抑制MMP-2/9、CD44和CD133的表达逆转MSC-CM诱导的细胞增殖和迁移。
目的： 探讨鞘氨醇激酶1 （sphigosine kinase 1, SphK1）基因下调对间充质干细胞（mesenchymal stem cell, MSC）诱导的 结肠癌RKO细胞增殖和迁移的影响。 方法： 采用MSC条件培养液（MSC-CM）和对照培养液（Control-CM）分别干预RKO细胞， CCK-8法检测细胞的增殖能力，Transwell实验检测细胞的迁移能力，Western blotting法检测Ki-67抗原（Ki-67）、MMP-2/9、肿瘤干 细胞标志物CD44和CD133蛋白的表达。用慢病毒shRNA载体转染RKO细胞抑制SphK1的表达，观察抑制SphK1的表达对 MSC-CM诱导的RKO细胞增殖、迁移以及MMP-2/9、CD44和CD133蛋白表达的影响。 结果： MSC-CM可时间依赖性促进RKO 细胞的增殖(P<0.05)，并明显增强细胞的迁移能力(P<0.01)和细胞中Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达(均P<0.05或P< 0.01)。慢病毒shRNA转染明显抑制RKO细胞SphK1的表达，抑制SphK1的表达可显著抑制MSC-CM对RKO细胞增殖和迁移的 促进作用(均P<0.05或P<0.01)，且明显抑制MSC-CM诱导的Ki-67、MMP-2/9、CD44和CD133蛋白的表达。 结论： MSC-CM可 促进RKO细胞的增殖和迁移，下调SphK1可通过抑制MMP-2/9、CD44和CD133的表达逆转MSC-CM诱导的细胞增殖和迁移。
2018, 25(3):229-235.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.003
摘要:
目的： 探讨靶向干扰细胞因子诱导凋亡抑制因子1 （cytokine induced apoptosis inhibitor 1，CIAPIN1）基因表达后慢性 粒细胞性白血病K562细胞对伊马替尼的敏感性。 方法 ：构建靶向CIAPIN1基因的shRNA干扰载体；使用实时定量PCR、West- ern blotting以及免疫荧光评价CIAPIN1-shRNA组（CIAPIN1-shRNA转染）和scramble-shRNA组（scramble-shRNA转染K562细 胞）干扰效率；伊马替尼（imatinib）处理两组K562细胞后，MTT法检测其增殖能力，集落形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细 胞术和Western blotting检测细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白的变化。 结果： shRNA干扰可有效抑制CIAPIN1表达，CIAPIN1- shRNA组的CIAPIN1 mRNA表达量为scramble-shRNA组的(29.74±4.03)%、CIAPIN1蛋白表达量前者为后者的(21.57±2.18)%。 CIAPIN1表达下调能显著抑制伊马替尼对K562细胞的增殖和克隆形成，CIAPIN1-shRNA+imatinib组的细胞克隆形成数为 （15.60±1.03）个/视野，克隆半径为（2.63±0.55）μm，均小于scramble-shRNA+imatinib组（P<0.05或P<0.01）。CIAPIN1-shRNA+ imatinib组的细胞G1期细胞比例比scramble-shRNA+imatinib组明显增多，S期细胞比例较scramble-shRNA+imatinib组明显减少 （均P<0.01）。CIAPIN1-shRNA+imatinib组K562细胞凋亡率明显增加（P<0.01）。敲除CIAPIN1能抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Bcl-xl、Bcl-2、Mcl-1表达，诱导细胞内细胞凋亡相关蛋白p21、Bid、Bim表达，且与伊马替尼具有协同作用。 结论： CIAPIN1表 达下调可明显提高K562细胞对伊马替尼的敏感性，该作用主要通过阻滞K562细胞周期及诱导凋亡相关蛋白表达实现。
目的： 探讨靶向干扰细胞因子诱导凋亡抑制因子1 （cytokine induced apoptosis inhibitor 1，CIAPIN1）基因表达后慢性 粒细胞性白血病K562细胞对伊马替尼的敏感性。 方法 ：构建靶向CIAPIN1基因的shRNA干扰载体；使用实时定量PCR、West- ern blotting以及免疫荧光评价CIAPIN1-shRNA组（CIAPIN1-shRNA转染）和scramble-shRNA组（scramble-shRNA转染K562细 胞）干扰效率；伊马替尼（imatinib）处理两组K562细胞后，MTT法检测其增殖能力，集落形成实验检测细胞克隆形成能力，流式细 胞术和Western blotting检测细胞周期、凋亡及凋亡相关蛋白的变化。 结果： shRNA干扰可有效抑制CIAPIN1表达，CIAPIN1- shRNA组的CIAPIN1 mRNA表达量为scramble-shRNA组的(29.74±4.03)%、CIAPIN1蛋白表达量前者为后者的(21.57±2.18)%。 CIAPIN1表达下调能显著抑制伊马替尼对K562细胞的增殖和克隆形成，CIAPIN1-shRNA+imatinib组的细胞克隆形成数为 （15.60±1.03）个/视野，克隆半径为（2.63±0.55）μm，均小于scramble-shRNA+imatinib组（P<0.05或P<0.01）。CIAPIN1-shRNA+ imatinib组的细胞G1期细胞比例比scramble-shRNA+imatinib组明显增多，S期细胞比例较scramble-shRNA+imatinib组明显减少 （均P<0.01）。CIAPIN1-shRNA+imatinib组K562细胞凋亡率明显增加（P<0.01）。敲除CIAPIN1能抑制细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Bcl-xl、Bcl-2、Mcl-1表达，诱导细胞内细胞凋亡相关蛋白p21、Bid、Bim表达，且与伊马替尼具有协同作用。 结论： CIAPIN1表 达下调可明显提高K562细胞对伊马替尼的敏感性，该作用主要通过阻滞K562细胞周期及诱导凋亡相关蛋白表达实现。
2018, 25(3):236-239.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.004
摘要:
目的： 探讨四环素调控（Tet-on）livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响，以期寻找更优的肺癌干预调控系统。 方法 : 构建Tet-on livin shRNA慢病毒载体，在裸鼠右上肢背部皮下注射肺腺癌A549株细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型，以 Tet-on livin shRNA慢病毒载体注射瘤体干预livin表达，并以四环素腹腔注射诱导处理，了解Tet-on调控livin RNA干扰效果并观 察其抑制肺癌细胞增殖情况。 结果: 经四环素诱导，Tet-on livin RNA组移植瘤组织中livin蛋白表达明显低于CTL组及Tet-on- NC组，且Tet-on-livin RNA组瘤体质量明显低于CTL组及Tet-on-NC组[ （5.31±0.86）vs（8.22±0.63）、 （7.17±0.54）g，P<0.05]；提示 该调控系统可显著下调livin的表达，并抑制肺癌皮下移植瘤的生长，且该调控系统毒副作用小，未发现裸鼠死亡。 结论: Tet-on livin RNA干扰系统在四环素诱导下可抑制肺癌生长，具有靶向性、可调控的特点，为以livin蛋白为靶点的肺癌靶向治疗研究提 供重要的研究工具。
目的： 探讨四环素调控（Tet-on）livin RNA干扰系统对肺癌移植瘤生长的影响，以期寻找更优的肺癌干预调控系统。 方法 : 构建Tet-on livin shRNA慢病毒载体，在裸鼠右上肢背部皮下注射肺腺癌A549株细胞建立肺癌裸鼠皮下移植瘤模型，以 Tet-on livin shRNA慢病毒载体注射瘤体干预livin表达，并以四环素腹腔注射诱导处理，了解Tet-on调控livin RNA干扰效果并观 察其抑制肺癌细胞增殖情况。 结果: 经四环素诱导，Tet-on livin RNA组移植瘤组织中livin蛋白表达明显低于CTL组及Tet-on- NC组，且Tet-on-livin RNA组瘤体质量明显低于CTL组及Tet-on-NC组[ （5.31±0.86）vs（8.22±0.63）、 （7.17±0.54）g，P<0.05]；提示 该调控系统可显著下调livin的表达，并抑制肺癌皮下移植瘤的生长，且该调控系统毒副作用小，未发现裸鼠死亡。 结论: Tet-on livin RNA干扰系统在四环素诱导下可抑制肺癌生长，具有靶向性、可调控的特点，为以livin蛋白为靶点的肺癌靶向治疗研究提 供重要的研究工具。
2018, 25(3):240-245.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.005
摘要:
目的： 建立三阴性乳腺癌紫杉醇耐药细胞株并考察FA/BRCA通路相关基因FANCF在该细胞株紫衫醇耐药中的作 用。 方法： 以药物浓度递增法诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231成为紫杉醇耐药细胞株，采用CCK8法检测细胞的耐药指 数，流式细胞术检测细胞的生长周期，qRT-PCR检测FA/BRCA通路相关基因FANCF的表达；Western blotting 法验证相关蛋白的 表达。对MDA-MB-231敏感细胞和紫杉醇耐药细胞中FANCF的表达进行敲减，并在mRNA和蛋白水平进行敲减效果验证，以 CCK8法检测紫杉醇对该两种细胞的IC 50 。 结果： MDA-MB-231细胞紫杉醇诱导3个月后的耐药指数为9.9，该细胞的G0/G1期 细胞增多且S期细胞减少，细胞中FANCF mRNA和蛋白表达水平显著升高。FANCF敲低后无论MDA-MB-231还是MDA-MB- 231/PTX细胞的凋亡增加，对紫杉醇敏感性显著升高(P<0.05或P<0.01)。 结论： FANCF基因在乳腺癌紫杉醇耐药中具有重要作 用，可能是乳腺癌治疗的一个潜在靶点。
目的： 建立三阴性乳腺癌紫杉醇耐药细胞株并考察FA/BRCA通路相关基因FANCF在该细胞株紫衫醇耐药中的作 用。 方法： 以药物浓度递增法诱导三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231成为紫杉醇耐药细胞株，采用CCK8法检测细胞的耐药指 数，流式细胞术检测细胞的生长周期，qRT-PCR检测FA/BRCA通路相关基因FANCF的表达；Western blotting 法验证相关蛋白的 表达。对MDA-MB-231敏感细胞和紫杉醇耐药细胞中FANCF的表达进行敲减，并在mRNA和蛋白水平进行敲减效果验证，以 CCK8法检测紫杉醇对该两种细胞的IC 50 。 结果： MDA-MB-231细胞紫杉醇诱导3个月后的耐药指数为9.9，该细胞的G0/G1期 细胞增多且S期细胞减少，细胞中FANCF mRNA和蛋白表达水平显著升高。FANCF敲低后无论MDA-MB-231还是MDA-MB- 231/PTX细胞的凋亡增加，对紫杉醇敏感性显著升高(P<0.05或P<0.01)。 结论： FANCF基因在乳腺癌紫杉醇耐药中具有重要作 用，可能是乳腺癌治疗的一个潜在靶点。
2018, 25(3):246-251.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.006
摘要:
目的： 探讨干预 HBV 阳性肝癌细胞相关 miRNAs 对肝癌细胞索拉菲尼敏感性的影响。 方法： qPCR 检测 HepG2.2.15 （HBV阳性）和HepG2.vc （HBV阴性）肝癌细胞中miR-29、miR-101和miR-193b的表达，以HepG2.2.15细胞中低表达 的miRNA合成相应的miRNA mimics，并将目标miRNA mimics分别转染至HepG2.2.15和HepG2.vc细胞；qPCR检测两种细胞中 目标miRNA表达，Western blotting检测目标miRNA mimics转染前后Mcl-1蛋白表达。同时分别向转染和非转染的HepG2.2.15 和HepG2.vc细胞中分别加入（1×10 -9 ）~（1×10 -3 ）mol/L的索拉菲尼，72 h后测定索加菲尼对细胞作用的IC 50 值和细胞凋亡率。 结 果： 与HepG2.vc细胞比较，HepG2.2.15细胞中miR-193b的表达显著降低（P<0.05）；与miR-193b mimics转染前比较，HepG2.2.15 和HepG2.vc细胞中miR-193b的表达均有显著升高（P<0.05）。与HepG2.vc细胞比较，HepG2.2.15细胞中Mcl-1蛋白表达显著增 高（P<0.05）；miR-193b mimics转染后，HepG2.2.15和HepG2.vc细胞中Mcl-1蛋白表达较两者转染前均有显著降低（P<0.05）； miR-193b mimics 转染后，索拉菲尼可显著增加两组细胞的凋亡率（P<0.01），同时其对两组细胞作用的 IC 50 值显著降低 [HepG2.2.15细胞： （0.215±0.028）vs (0.391±0.025) mol/L,HepG2.vc细胞： （0.315±0.027）vs (0.654±0.019) mol/L;均P<0.01]。 结 论： HBV相关肝癌细胞中miR-193b的低表达可能是癌细胞对索拉菲尼敏感性降低的原因，Mcl-1可能为miR-193b的靶点，miR- 193b mimics与索拉菲尼具有显著协同作用。
目的： 探讨干预 HBV 阳性肝癌细胞相关 miRNAs 对肝癌细胞索拉菲尼敏感性的影响。 方法： qPCR 检测 HepG2.2.15 （HBV阳性）和HepG2.vc （HBV阴性）肝癌细胞中miR-29、miR-101和miR-193b的表达，以HepG2.2.15细胞中低表达 的miRNA合成相应的miRNA mimics，并将目标miRNA mimics分别转染至HepG2.2.15和HepG2.vc细胞；qPCR检测两种细胞中 目标miRNA表达，Western blotting检测目标miRNA mimics转染前后Mcl-1蛋白表达。同时分别向转染和非转染的HepG2.2.15 和HepG2.vc细胞中分别加入（1×10 -9 ）~（1×10 -3 ）mol/L的索拉菲尼，72 h后测定索加菲尼对细胞作用的IC 50 值和细胞凋亡率。 结 果： 与HepG2.vc细胞比较，HepG2.2.15细胞中miR-193b的表达显著降低（P<0.05）；与miR-193b mimics转染前比较，HepG2.2.15 和HepG2.vc细胞中miR-193b的表达均有显著升高（P<0.05）。与HepG2.vc细胞比较，HepG2.2.15细胞中Mcl-1蛋白表达显著增 高（P<0.05）；miR-193b mimics转染后，HepG2.2.15和HepG2.vc细胞中Mcl-1蛋白表达较两者转染前均有显著降低（P<0.05）； miR-193b mimics 转染后，索拉菲尼可显著增加两组细胞的凋亡率（P<0.01），同时其对两组细胞作用的 IC 50 值显著降低 [HepG2.2.15细胞： （0.215±0.028）vs (0.391±0.025) mol/L,HepG2.vc细胞： （0.315±0.027）vs (0.654±0.019) mol/L;均P<0.01]。 结 论： HBV相关肝癌细胞中miR-193b的低表达可能是癌细胞对索拉菲尼敏感性降低的原因，Mcl-1可能为miR-193b的靶点，miR- 193b mimics与索拉菲尼具有显著协同作用。
2018, 25(3):252-257.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.007
摘要:
目的: 探讨乌苏酸联合吉西他滨对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。 方法: 以乌苏酸、吉西他滨单独用药作 用于体外培养的胰腺癌细胞PANC-1细胞，采用细MTT法检测细胞半抑制浓度（IC 50 ），确定药物给药浓度；以乌苏酸(2 μ mol/L) 、 吉西他滨(0.2 μ mol/L)单独及联合作用于PANC-1细胞，采用锥虫蓝染色法检测PANC-1细胞存活率，PI染色后PANC-1细胞中检 测细胞凋亡，采用细胞划痕实验检测PANC-1细胞迁移和伤口愈合情况，采用Western blotting检测对照组、乌苏酸组与吉西他滨 组单独及联合用药组细胞中P-JNK、Bcl-2、IL-6、P-Stat 3、NF-κB和Cox-2蛋白的表达。 结果: 乌苏酸和吉西他滨对胰腺癌 PANC-1细胞均有较强的抑制作用，其IC 50 分别是13.67和2.78 μ mol/L，据此选择它们的实验浓度分别为2和0.2 μ mol/L。两者联 合用药比分别单独用药能更显著抑制癌细胞的增殖活性[(46.47±5.07)% vs (78.38±8.65)%、(76.12±3.23)%，均P<0.05]，能更明显 诱导癌细胞凋亡[(39.78±7.01)% vs (20.35±8.51)%、(20.35±8.51)%，均P<0.01]和抑制细胞迁移能力（P<0.01），同时更显著抑制凋亡 相关蛋白Bcl-2、IL-6的表达及促进P-JNK的表达。 结论: 乌苏酸和吉西他滨协同增强抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖和迁移以 及促凋亡作用，其机制可能与抑制Bcl-2、IL-6、P-Stat 3和促进P-JNK蛋白表达有关。
目的: 探讨乌苏酸联合吉西他滨对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响。 方法: 以乌苏酸、吉西他滨单独用药作 用于体外培养的胰腺癌细胞PANC-1细胞，采用细MTT法检测细胞半抑制浓度（IC 50 ），确定药物给药浓度；以乌苏酸(2 μ mol/L) 、 吉西他滨(0.2 μ mol/L)单独及联合作用于PANC-1细胞，采用锥虫蓝染色法检测PANC-1细胞存活率，PI染色后PANC-1细胞中检 测细胞凋亡，采用细胞划痕实验检测PANC-1细胞迁移和伤口愈合情况，采用Western blotting检测对照组、乌苏酸组与吉西他滨 组单独及联合用药组细胞中P-JNK、Bcl-2、IL-6、P-Stat 3、NF-κB和Cox-2蛋白的表达。 结果: 乌苏酸和吉西他滨对胰腺癌 PANC-1细胞均有较强的抑制作用，其IC 50 分别是13.67和2.78 μ mol/L，据此选择它们的实验浓度分别为2和0.2 μ mol/L。两者联 合用药比分别单独用药能更显著抑制癌细胞的增殖活性[(46.47±5.07)% vs (78.38±8.65)%、(76.12±3.23)%，均P<0.05]，能更明显 诱导癌细胞凋亡[(39.78±7.01)% vs (20.35±8.51)%、(20.35±8.51)%，均P<0.01]和抑制细胞迁移能力（P<0.01），同时更显著抑制凋亡 相关蛋白Bcl-2、IL-6的表达及促进P-JNK的表达。 结论: 乌苏酸和吉西他滨协同增强抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖和迁移以 及促凋亡作用，其机制可能与抑制Bcl-2、IL-6、P-Stat 3和促进P-JNK蛋白表达有关。
2018, 25(3):258-262.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.008
摘要:
目的： 通过免疫共沉淀与质谱分析技术从宫颈癌HeLa细胞中获取与S期激酶相关蛋白2 （S-phase kinase-associated protein 2，SKP2）结合的蛋白质群体并预测其生物功能。 方法： 以免疫共沉淀与Western blotting技术建立SKP2免疫共沉淀体系， 以SDS-PAGE和银染技术获得SKP2结合蛋白的特异条带，通过质谱分析技术获得可能与SKP2结合的蛋白群体，应用生物信息 学技术对筛选得到的蛋白进行GO分析与KEGG分析。 结果： HeLa细胞内存在一定水平的SKP2蛋白表达，可进行免疫共沉淀 反应；成功建立了SKP2免疫共沉淀体系，并获得SKP2结合蛋白样品；针对差异的凝胶条带进行质谱分析，共鉴定出SKP2结合蛋 白563个；设定筛选条件后，获得可信度较高的SKP2蛋白270个，进行GO分析与KEGG分析后初步预测了结合蛋白参与的细胞 功能和信号通路。 结论： 从宫颈癌HeLa细胞中成功筛选获取SKP2 结合蛋白，为后续筛选靶标结合蛋白和寻找细胞靶向药物奠 定了基础。
目的： 通过免疫共沉淀与质谱分析技术从宫颈癌HeLa细胞中获取与S期激酶相关蛋白2 （S-phase kinase-associated protein 2，SKP2）结合的蛋白质群体并预测其生物功能。 方法： 以免疫共沉淀与Western blotting技术建立SKP2免疫共沉淀体系， 以SDS-PAGE和银染技术获得SKP2结合蛋白的特异条带，通过质谱分析技术获得可能与SKP2结合的蛋白群体，应用生物信息 学技术对筛选得到的蛋白进行GO分析与KEGG分析。 结果： HeLa细胞内存在一定水平的SKP2蛋白表达，可进行免疫共沉淀 反应；成功建立了SKP2免疫共沉淀体系，并获得SKP2结合蛋白样品；针对差异的凝胶条带进行质谱分析，共鉴定出SKP2结合蛋 白563个；设定筛选条件后，获得可信度较高的SKP2蛋白270个，进行GO分析与KEGG分析后初步预测了结合蛋白参与的细胞 功能和信号通路。 结论： 从宫颈癌HeLa细胞中成功筛选获取SKP2 结合蛋白，为后续筛选靶标结合蛋白和寻找细胞靶向药物奠 定了基础。
2018, 25(3):263-269.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.009
摘要:
目的： 探讨FBXW7基因点突变对结直肠癌细胞株HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。 方法： 通过构建FBXW7 基因野生型及突变型过表达的重组载体，并将其转染HCT-116细胞，应用Western blotting检测转染后FBXW7蛋白表达情况。 CCK-8检测细胞增殖能力,平板细胞克隆形成实验(HTCA)检测肿瘤细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕及 Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移和侵袭能力。 结果： 转染野生型FBXW7基因的HCT-116细胞中FBXW7蛋白表达水平高 于对照组（转染突变型FBXW7基因的HCT-116细胞）、阴性对照组（转染空质粒载体pEZ-M90的HCT-116细胞）及空白对照组（未 进行任何特殊处理的HCT-116细胞） （均P<0.05）。转染野生型FBXW7的HCT-116细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力相较 于其余各组均显著下降（均P<0.05），且细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。 结论： FBXW7基因点突变可使其蛋白表达水平降低，从 而促进结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭，并抑制其凋亡。
目的： 探讨FBXW7基因点突变对结直肠癌细胞株HCT-116增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。 方法： 通过构建FBXW7 基因野生型及突变型过表达的重组载体，并将其转染HCT-116细胞，应用Western blotting检测转染后FBXW7蛋白表达情况。 CCK-8检测细胞增殖能力,平板细胞克隆形成实验(HTCA)检测肿瘤细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕及 Transwell细胞迁移实验检测细胞迁移和侵袭能力。 结果： 转染野生型FBXW7基因的HCT-116细胞中FBXW7蛋白表达水平高 于对照组（转染突变型FBXW7基因的HCT-116细胞）、阴性对照组（转染空质粒载体pEZ-M90的HCT-116细胞）及空白对照组（未 进行任何特殊处理的HCT-116细胞） （均P<0.05）。转染野生型FBXW7的HCT-116细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力相较 于其余各组均显著下降（均P<0.05），且细胞凋亡率显著升高（P<0.05）。 结论： FBXW7基因点突变可使其蛋白表达水平降低，从 而促进结直肠癌HCT-116细胞的增殖、迁移和侵袭，并抑制其凋亡。
2018, 25(3):270-274.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.010
摘要:
目的： 探讨Tim-4促进子宫颈癌细胞侵袭与迁移及其相关机制。 方法： 用实时荧光定量PCR法检测子宫颈癌细胞系 Siha、Hela与子宫颈上皮永生化细胞系H8中Tim-4的表达水平。在较低表达Tim-4的Siha细胞系感染携Tim-4的慢病毒载体，荧 光显微镜观测Siha细胞系转染Tim-4的表达水平。用Transwell及划痕实验检测Tim-4对子宫颈癌细胞系Siha的侵袭与迁转移能 力的影响，用Western blotting检测Siha细胞转染Tim-4后MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin的变化。 结果： 子宫颈癌细胞系 Siha、Hela与宫颈上皮永生化细胞系H8相比高表达Tim-4。成功构建携Tim-4慢病毒载体的Siha细胞系；Tim-4明显抑制子宫颈 癌细胞系Siha的迁移与侵袭能力，且影响了MMP2、MMP9及N-cadherin、E-cadherin的表达水平。 结论： 过表达Tim-4可促进子 宫颈癌细胞的侵袭与迁移能力，其机制可能与Tim-4促进Siha细胞EMT转化有关。
目的： 探讨Tim-4促进子宫颈癌细胞侵袭与迁移及其相关机制。 方法： 用实时荧光定量PCR法检测子宫颈癌细胞系 Siha、Hela与子宫颈上皮永生化细胞系H8中Tim-4的表达水平。在较低表达Tim-4的Siha细胞系感染携Tim-4的慢病毒载体，荧 光显微镜观测Siha细胞系转染Tim-4的表达水平。用Transwell及划痕实验检测Tim-4对子宫颈癌细胞系Siha的侵袭与迁转移能 力的影响，用Western blotting检测Siha细胞转染Tim-4后MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin的变化。 结果： 子宫颈癌细胞系 Siha、Hela与宫颈上皮永生化细胞系H8相比高表达Tim-4。成功构建携Tim-4慢病毒载体的Siha细胞系；Tim-4明显抑制子宫颈 癌细胞系Siha的迁移与侵袭能力，且影响了MMP2、MMP9及N-cadherin、E-cadherin的表达水平。 结论： 过表达Tim-4可促进子 宫颈癌细胞的侵袭与迁移能力，其机制可能与Tim-4促进Siha细胞EMT转化有关。
2018, 25(3):275-280.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.011
摘要:
目的： 研究左半结肠癌和直肠癌患者的临床病理特征及生存期之间的差异。 方法： 选取2011年1月至2012年1月在 第二军医大学长海医院行手术切除的323例原发性结直肠癌患者为研究对象，收集患者临床特征资料，以手术日期或病理确诊日 期为随访起点对患者或家属进行随访，以死亡为终点事件，随访时间截至2017年8月1日。 结果： 左半结肠癌和直肠癌患者在首 发症状、组织学类型、肿瘤分期、术前是否贫血、p53阳性率及 BRAF 基因突变状态之间差异有统计学意义（ χ 2 =59.088，4.188， 24.305，11.956，4.221，4.001；均 P <0.05）。左半结肠癌和直肠癌中位生存时间均未观察到。左半结肠癌、直肠癌的5年生存率分别 为79.2%、74.3%。Ⅰ期、Ⅱ期左半结肠癌和直肠癌患者生存曲线差异无统计学意义（ P> 0.05），Ⅲ期左半结肠癌和直肠癌患者生存曲 线差异无统计学意义（ P >0.05）。Cox比例风险分析结果显示，病理类型( HR =1.759， P <0.05)和肿瘤分期( HR =2.104， P <0.01)是影响 结直肠癌患者OS的独立危险因素。 结论 ：左半结肠癌和直肠癌生存时间未见不同，病理类型及肿瘤分期可能为结直肠癌患者 OS的影响因素。
目的： 研究左半结肠癌和直肠癌患者的临床病理特征及生存期之间的差异。 方法： 选取2011年1月至2012年1月在 第二军医大学长海医院行手术切除的323例原发性结直肠癌患者为研究对象，收集患者临床特征资料，以手术日期或病理确诊日 期为随访起点对患者或家属进行随访，以死亡为终点事件，随访时间截至2017年8月1日。 结果： 左半结肠癌和直肠癌患者在首 发症状、组织学类型、肿瘤分期、术前是否贫血、p53阳性率及 BRAF 基因突变状态之间差异有统计学意义（ χ 2 =59.088，4.188， 24.305，11.956，4.221，4.001；均 P <0.05）。左半结肠癌和直肠癌中位生存时间均未观察到。左半结肠癌、直肠癌的5年生存率分别 为79.2%、74.3%。Ⅰ期、Ⅱ期左半结肠癌和直肠癌患者生存曲线差异无统计学意义（ P> 0.05），Ⅲ期左半结肠癌和直肠癌患者生存曲 线差异无统计学意义（ P >0.05）。Cox比例风险分析结果显示，病理类型( HR =1.759， P <0.05)和肿瘤分期( HR =2.104， P <0.01)是影响 结直肠癌患者OS的独立危险因素。 结论 ：左半结肠癌和直肠癌生存时间未见不同，病理类型及肿瘤分期可能为结直肠癌患者 OS的影响因素。
2018, 25(3):281-287.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.012
摘要:
目的： 研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。 方法： 通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上，通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。 以细胞计数法和CFSE/7-AAD流式术分别对NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性和细胞毒性进行 比较。将正常人PBMC与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外共培养后，用流式细胞术检测PBMC中T细 胞的表型变化；同时检测正常人活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞共存时相互的细胞毒性以 及对肿瘤细胞的毒性比较。 结果： 成功构建了高表达IL-21的NK-92MI/IL-21细胞和同时高表达IL-7和IL-21的NK-92MI/IL-7& 21细胞；NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对Jurkat和K562细胞的细胞毒性没有变化，但是NK-92MI/IL-21和 NK-92MI/IL-7&21细胞相对于亲本细胞NK-92MI的体外增殖活性有所提高；NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对PBMC 中T细胞的活化有一定的促进作用；活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相互之间几乎无细胞 毒性；同时，当T细胞和3种NK细胞共存时，T细胞不影响NK细胞对K562细胞的细胞毒性。 结论： 基因工程修饰的NK-92MI/ IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性有所提高，它们对外周血T细胞的活化有一定的刺激和促进作用；T细胞和NK- 92MI细胞之间无细胞毒性，同时活化T细胞的存在不影响NK-92MI细胞的细胞毒性。
目的： 研究经IL-7和IL-21修饰后的NK-92MI细胞的增殖和细胞毒性及其对正常人外周血中T细胞的影响。 方法： 通过基因工程将IL-7和IL-21基因片段构建到电转载体上，通过电转的方式构建了NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞。 以细胞计数法和CFSE/7-AAD流式术分别对NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性和细胞毒性进行 比较。将正常人PBMC与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外共培养后，用流式细胞术检测PBMC中T细 胞的表型变化；同时检测正常人活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞共存时相互的细胞毒性以 及对肿瘤细胞的毒性比较。 结果： 成功构建了高表达IL-21的NK-92MI/IL-21细胞和同时高表达IL-7和IL-21的NK-92MI/IL-7& 21细胞；NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对Jurkat和K562细胞的细胞毒性没有变化，但是NK-92MI/IL-21和 NK-92MI/IL-7&21细胞相对于亲本细胞NK-92MI的体外增殖活性有所提高；NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞对PBMC 中T细胞的活化有一定的促进作用；活化后的T细胞与NK-92MI、NK-92MI/IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞相互之间几乎无细胞 毒性；同时，当T细胞和3种NK细胞共存时，T细胞不影响NK细胞对K562细胞的细胞毒性。 结论： 基因工程修饰的NK-92MI/ IL-21和NK-92MI/IL-7&21细胞体外增殖活性有所提高，它们对外周血T细胞的活化有一定的刺激和促进作用；T细胞和NK- 92MI细胞之间无细胞毒性，同时活化T细胞的存在不影响NK-92MI细胞的细胞毒性。
13 胰腺癌免疫治疗的研究进展
2018, 25(3):288-292.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.013
摘要:
胰腺癌是恶性程度最高的消化系统肿瘤，免疫治疗在胰腺癌领域的研究取得较大进展。目前对免疫检查点的研究主 要集中在细胞毒T淋巴细胞抗原4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4,CTLA-4)及程序性细胞死亡分子1 (programmed death-1，PD- 1)/程序性死亡蛋白配体1 (programmed death-ligand 1,PD-L1)等分子的研究。已有大量疫苗应用于胰腺癌：靶向KRas、MUC-1/ CEA、WT1 (Wilms tumor-1) 、热激蛋白、多肽疫苗以及VEGFR2 等，其中取得较好效果的有全肿瘤疫苗(如algenpantucel-L)、端粒 酶多肽疫苗(GV1001)、GVAX瘤苗和WT1疫苗等。T细胞也可以控制胰腺癌的进展，大多数免疫疗法在胰腺癌的临床前期实验 中依靠改进T细胞功能来提高疗效，但未来应用于临床还有待进一步深入研究。
胰腺癌是恶性程度最高的消化系统肿瘤，免疫治疗在胰腺癌领域的研究取得较大进展。目前对免疫检查点的研究主 要集中在细胞毒T淋巴细胞抗原4(cytotoxic T lymphocyte antigen-4,CTLA-4)及程序性细胞死亡分子1 (programmed death-1，PD- 1)/程序性死亡蛋白配体1 (programmed death-ligand 1,PD-L1)等分子的研究。已有大量疫苗应用于胰腺癌：靶向KRas、MUC-1/ CEA、WT1 (Wilms tumor-1) 、热激蛋白、多肽疫苗以及VEGFR2 等，其中取得较好效果的有全肿瘤疫苗(如algenpantucel-L)、端粒 酶多肽疫苗(GV1001)、GVAX瘤苗和WT1疫苗等。T细胞也可以控制胰腺癌的进展，大多数免疫疗法在胰腺癌的临床前期实验 中依靠改进T细胞功能来提高疗效，但未来应用于临床还有待进一步深入研究。
2018, 25(3):293-299.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.014
摘要:
人体免疫系统是由固有免疫和适应性免疫应答组成。适应性免疫应答在抗原入侵时扮演着至关重要的角色，而CD4 + 辅助性T（CD4 + T helper, CD4 + Th）细胞是适应性免疫应答的主要组成部分。最近新发现的一类不同于Th1和Th2细胞亚群且能 特征性分泌白细胞介素17 (interleukin-17, IL-17)的辅助性T细胞亚群，被命名为Th17细胞。Th17 细胞参与很多炎症性疾病、自 身免疫性疾病和肿瘤等的发展过程，可通过分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-23、粒细胞-巨噬细胞克隆刺激因子(granulocyte- macrophage colony stimulating factor，GM-CSF)和干扰素γ （interferon-gamma，IFN-γ）等炎症细胞因子来发挥免疫效应和炎症效 应。但是Th17细胞是否参与肿瘤的发生发展、具体作用机制以及发挥促肿瘤还是抑肿瘤效应等问题存在很多争议。本文综述 了近年来Th17细胞分化调节过程的相关机制，以及其在肿瘤发生发展的作用，旨在为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。
人体免疫系统是由固有免疫和适应性免疫应答组成。适应性免疫应答在抗原入侵时扮演着至关重要的角色，而CD4 + 辅助性T（CD4 + T helper, CD4 + Th）细胞是适应性免疫应答的主要组成部分。最近新发现的一类不同于Th1和Th2细胞亚群且能 特征性分泌白细胞介素17 (interleukin-17, IL-17)的辅助性T细胞亚群，被命名为Th17细胞。Th17 细胞参与很多炎症性疾病、自 身免疫性疾病和肿瘤等的发展过程，可通过分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22、IL-23、粒细胞-巨噬细胞克隆刺激因子(granulocyte- macrophage colony stimulating factor，GM-CSF)和干扰素γ （interferon-gamma，IFN-γ）等炎症细胞因子来发挥免疫效应和炎症效 应。但是Th17细胞是否参与肿瘤的发生发展、具体作用机制以及发挥促肿瘤还是抑肿瘤效应等问题存在很多争议。本文综述 了近年来Th17细胞分化调节过程的相关机制，以及其在肿瘤发生发展的作用，旨在为肿瘤的诊断和治疗提供新的思路。
2018, 25(3):300-304.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.015
摘要:
黑色素瘤缺乏因子2(absent in melanoma 2, AIM2)定位于细胞质中，可作为模式识别受体感受释放到胞质中的dsD- NA，通过与ASC接头蛋白结合形成炎性小体，从而激活Caspase-1促进炎性细胞因子的分泌和成熟，启动固有免疫应答或细胞焦 亡(pyroptosis)。AIM2被认为是一种肿瘤抑制因子，在多种肿瘤中有异常表达，在肿瘤的发生发展中起到重要作用，能调控急性 电离辐射和化疗引发的结直肠炎症。炎性小体在维持肠道内环境稳态的过程中也起到重要的作用。AIM2能调控细胞周期，抑 制细胞异常增殖，PIK3/Akt通路在结直肠癌（colorectal cancer, CRC)的发生发展中起到重要作用。AIM2能促使IFN-γ和IL-1β分 泌，激发抗肿瘤免疫应答。AIM2还能调控肠道干细胞扩增，调节肠道菌群。AIM2的缺失与CRC的不良预后显著相关，其表达 在CRC的发生发展中起到重要的预后价值。研究AIM2炎性小体在抗肿瘤免疫应答中的作用，对探索和优化CRC免疫治疗过程 的方法有着重要的意义。
黑色素瘤缺乏因子2(absent in melanoma 2, AIM2)定位于细胞质中，可作为模式识别受体感受释放到胞质中的dsD- NA，通过与ASC接头蛋白结合形成炎性小体，从而激活Caspase-1促进炎性细胞因子的分泌和成熟，启动固有免疫应答或细胞焦 亡(pyroptosis)。AIM2被认为是一种肿瘤抑制因子，在多种肿瘤中有异常表达，在肿瘤的发生发展中起到重要作用，能调控急性 电离辐射和化疗引发的结直肠炎症。炎性小体在维持肠道内环境稳态的过程中也起到重要的作用。AIM2能调控细胞周期，抑 制细胞异常增殖，PIK3/Akt通路在结直肠癌（colorectal cancer, CRC)的发生发展中起到重要作用。AIM2能促使IFN-γ和IL-1β分 泌，激发抗肿瘤免疫应答。AIM2还能调控肠道干细胞扩增，调节肠道菌群。AIM2的缺失与CRC的不良预后显著相关，其表达 在CRC的发生发展中起到重要的预后价值。研究AIM2炎性小体在抗肿瘤免疫应答中的作用，对探索和优化CRC免疫治疗过程 的方法有着重要的意义。
2018, 25(3):305-309.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.016
摘要:
TET1 （ten-eleven-translocation 1）是一种羟甲基化酶基因，该酶能够催化5甲基胞嘧啶（5-methyl-cytosine，5mC）形成5 羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethyl-cytosine，5hmC），在DNA甲基化调控中发挥重要作用。最近研究表明， TET1 的低表达与肿瘤发 生有关，可作为癌症治疗潜在标志物，表明 TET1 可作为肿瘤抑制基因。此外，除了它的双氧酶活性外， TET1 还可以诱导上皮细 胞间质转变，并充当调节基因转录的辅助活化因子，如癌症的低氧应答基因的调节因子。这表明 TET1 也可做为癌基因促进肿瘤 的发生。因此，在癌症和发育生物学中，TET1的调控机制是十分复杂的， TET1 基因突变也已有报道。本文就TET1在肿瘤发生中 的不同作用进行了综述，深入阐述TET1的作用对拓展DNA去甲基化机制的认识及发现肿瘤治疗新靶标具有重要价值。
TET1 （ten-eleven-translocation 1）是一种羟甲基化酶基因，该酶能够催化5甲基胞嘧啶（5-methyl-cytosine，5mC）形成5 羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethyl-cytosine，5hmC），在DNA甲基化调控中发挥重要作用。最近研究表明， TET1 的低表达与肿瘤发 生有关，可作为癌症治疗潜在标志物，表明 TET1 可作为肿瘤抑制基因。此外，除了它的双氧酶活性外， TET1 还可以诱导上皮细 胞间质转变，并充当调节基因转录的辅助活化因子，如癌症的低氧应答基因的调节因子。这表明 TET1 也可做为癌基因促进肿瘤 的发生。因此，在癌症和发育生物学中，TET1的调控机制是十分复杂的， TET1 基因突变也已有报道。本文就TET1在肿瘤发生中 的不同作用进行了综述，深入阐述TET1的作用对拓展DNA去甲基化机制的认识及发现肿瘤治疗新靶标具有重要价值。
2018, 25(3):310-314.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.017
摘要:
P54nrb /NonO是一种能够行使多种生物学功能的核蛋白，在人体多种组织和细胞系中广泛表达并具有高度的种间保守 性，与多种疾病的发生、发展密切相关。近年来，P54 nrb /NonO在多种肿瘤中的作用报道逐渐增多，然而其具体的肿瘤生物学作用 和分子机制尚不明确。P54 nrb /NonO在乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、鼻咽癌、肺癌、血液系统肿瘤等多种肿瘤中发挥重 要作用。
P54nrb /NonO是一种能够行使多种生物学功能的核蛋白，在人体多种组织和细胞系中广泛表达并具有高度的种间保守 性，与多种疾病的发生、发展密切相关。近年来，P54 nrb /NonO在多种肿瘤中的作用报道逐渐增多，然而其具体的肿瘤生物学作用 和分子机制尚不明确。P54 nrb /NonO在乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、黑色素瘤、鼻咽癌、肺癌、血液系统肿瘤等多种肿瘤中发挥重 要作用。
2018, 25(3):315-317.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.03.018
摘要:
联系方式
- 《中国肿瘤生物治疗杂志》
- 1994年创刊
- 主办单位：中国免疫学会、中国抗癌学会
- 邮编：200433
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- 电子邮箱：cjcb@biother.cn
- 网址:http://www.biother.cn
- 刊号：ISSN 1007-385X
- CN 31-1725/R
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