2018年第25卷第7期文章目次
2018, 25(7):663-668.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.001
摘要:
[摘要] 近几年，免疫检查点抑制剂疗法飞速发展并取得突破性进展，成为多种晚期肿瘤的首选疗法。但由于其激活抗肿瘤免疫系统的独特作用模式，多种非常规缓解模式相继出现，如延迟反应和假性进展等，给传统疗效评价标准带来挑战，进而促使人们不断探索应对免疫治疗特殊反应的评价指南。本文主要对实体肿瘤多种免疫治疗相关疗效评价标准的探索进程、研究进展及各指南间异同进行系列阐述，并对其目前的挑战和未来发展趋势进行展望。
[摘要] 近几年，免疫检查点抑制剂疗法飞速发展并取得突破性进展，成为多种晚期肿瘤的首选疗法。但由于其激活抗肿瘤免疫系统的独特作用模式，多种非常规缓解模式相继出现，如延迟反应和假性进展等，给传统疗效评价标准带来挑战，进而促使人们不断探索应对免疫治疗特殊反应的评价指南。本文主要对实体肿瘤多种免疫治疗相关疗效评价标准的探索进程、研究进展及各指南间异同进行系列阐述，并对其目前的挑战和未来发展趋势进行展望。
2018, 25(7):669-673.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.002
摘要:
[摘要] 过去几十年来在干细胞生物学领域取得的进步，使得一种新型的3D类细胞体外培养技术问世，因其有着类似原器官的空间形态结构，故而称其为类器官。将肿瘤组织用该技术体外培养所形成的肿瘤类器官，极大程度保留了肿瘤细胞在体内的生物特性,且兼具低成本和便于操作的优点，弥补了以往传统肿瘤实验模型的缺陷。该模型还可用于转化医学研究，可进行包括药敏试验在内的个体化医疗方案的制定，并且具有和多种技术相结合的应用前景。本文重点讨论类器官在肿瘤研究中的应用及其发展潜力。
[摘要] 过去几十年来在干细胞生物学领域取得的进步，使得一种新型的3D类细胞体外培养技术问世，因其有着类似原器官的空间形态结构，故而称其为类器官。将肿瘤组织用该技术体外培养所形成的肿瘤类器官，极大程度保留了肿瘤细胞在体内的生物特性,且兼具低成本和便于操作的优点，弥补了以往传统肿瘤实验模型的缺陷。该模型还可用于转化医学研究，可进行包括药敏试验在内的个体化医疗方案的制定，并且具有和多种技术相结合的应用前景。本文重点讨论类器官在肿瘤研究中的应用及其发展潜力。
2018, 25(7):674-679.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.003
摘要:
目的：探讨化疗诱导损伤相关分子模式（damaged associated molecular patterns，DAMP)对CIK 细胞抑制RAS 突变A549 肺腺癌细胞的影响及其机制。方法：体外分离人外周血单个核细胞且培养CIK 细胞，以顺铂（cisplatin,DDP）和多柔比星（doxorubicin,ADM）单独或联合作用于A549 细胞，镜下观察A549 细胞的形态，将药物后的A549 细胞上清加入CIK细胞共培养，流式细胞术检测共培养后CIK 细胞免疫表型，MTT 实验检测A549 细胞上清诱导CIK 细胞对A549 肺腺癌细胞增殖的抑制，ELISA实验检测多种浓度化疗药物杀伤A549 细胞上清中CRT、ATP、HMGB1 含量。结果：低质量浓度化疗药杀伤A549 细胞后呈现较多的免疫原性死亡特征。杀伤后A549 细胞上清加入CIK 细胞共培养使CIK 细胞CD8+、CD56+的比例较对照CIK 细胞明显升高（均P<0.05）。A549 细胞损伤后上清诱导CIK细胞对A549 肺腺癌细胞增殖抑制率明显高于同质量浓度化疗药组[DDP组（31.34±1.51）% vs（5.97±1.74）%，ADM组（45.46±1.78）% vs（6.22±1.34）%，DDP+ADM组（45.78±1.14）% vs（11.94±3.11）%，均P<0.05]，并且低质量浓度化疗药物杀伤A549 细胞上清诱导的CIK对A549 细胞的抑制率高于较高浓度化疗药物杀伤后细胞上清诱导的CIK（均P<0.05）。低质量浓度化疗药物杀伤A549 细胞上清中免疫原性死亡相关分子CRT、ATP、HMGB1 含量增加得最多（均P<0.05）。低质量浓度组该上清诱导的CI 对A549 肺腺癌细胞的增殖抑制率随着CRT、ATP、HMGB1 水平的增高而增加。结论：较低质量浓度的DDP和ADM单独或联合用药更易引起A549 细胞免疫原性死亡并释放较高水平的DAMP分子，能更强的促进CIK对肺癌A549 细胞的抑制作用。
目的：探讨化疗诱导损伤相关分子模式（damaged associated molecular patterns，DAMP)对CIK 细胞抑制RAS 突变A549 肺腺癌细胞的影响及其机制。方法：体外分离人外周血单个核细胞且培养CIK 细胞，以顺铂（cisplatin,DDP）和多柔比星（doxorubicin,ADM）单独或联合作用于A549 细胞，镜下观察A549 细胞的形态，将药物后的A549 细胞上清加入CIK细胞共培养，流式细胞术检测共培养后CIK 细胞免疫表型，MTT 实验检测A549 细胞上清诱导CIK 细胞对A549 肺腺癌细胞增殖的抑制，ELISA实验检测多种浓度化疗药物杀伤A549 细胞上清中CRT、ATP、HMGB1 含量。结果：低质量浓度化疗药杀伤A549 细胞后呈现较多的免疫原性死亡特征。杀伤后A549 细胞上清加入CIK 细胞共培养使CIK 细胞CD8+、CD56+的比例较对照CIK 细胞明显升高（均P<0.05）。A549 细胞损伤后上清诱导CIK细胞对A549 肺腺癌细胞增殖抑制率明显高于同质量浓度化疗药组[DDP组（31.34±1.51）% vs（5.97±1.74）%，ADM组（45.46±1.78）% vs（6.22±1.34）%，DDP+ADM组（45.78±1.14）% vs（11.94±3.11）%，均P<0.05]，并且低质量浓度化疗药物杀伤A549 细胞上清诱导的CIK对A549 细胞的抑制率高于较高浓度化疗药物杀伤后细胞上清诱导的CIK（均P<0.05）。低质量浓度化疗药物杀伤A549 细胞上清中免疫原性死亡相关分子CRT、ATP、HMGB1 含量增加得最多（均P<0.05）。低质量浓度组该上清诱导的CI 对A549 肺腺癌细胞的增殖抑制率随着CRT、ATP、HMGB1 水平的增高而增加。结论：较低质量浓度的DDP和ADM单独或联合用药更易引起A549 细胞免疫原性死亡并释放较高水平的DAMP分子，能更强的促进CIK对肺癌A549 细胞的抑制作用。
2018, 25(7):680-686.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.004
摘要:
目的：观察SHIP1 对NSCLC细胞增殖的影响。方法：由NCBI Gene 数据库查询获得人SHIP1 基因CDS区，插至载体pTSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP，构建SHIP1 真核过表达质粒；进一步利用其构建SHIP1 过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1 和PC-9 细胞株，获得SHIP1 稳定过表达NSCLC细胞系。Western blotting 和qRT-PCR分别从蛋白水平和mRNA水平检测SHIP1 的表达变化。采用MTT法和克隆形成实验检测过表达SHIP1 的PC-9 细胞增殖活力和克隆形成能力。Western blotting检测AP-1 蛋白复合体各组分的表达。结果：SHIP1 真核过表达质粒经测序证实构建成功。稳定过表达SHIP1 的A549、SPCA-1 和PC-9 细胞，在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与阴性对照组比较，细胞中SHIP1 在mRNA（P<0.01）及蛋白水平均明显升高。在PC-9 细胞中，过表达SHIP1 使细胞增殖、克隆形成能力降低（均P<0.01），p-c-Jun、FosB 等表达降低。结论：成功构建了稳定过表达SHIP1 的A549、SPCA-1和PC-9 细胞模型；过表达SHIP1可通过抑制AP-1 家族蛋白抑制NSCLC细胞增殖能力。
目的：观察SHIP1 对NSCLC细胞增殖的影响。方法：由NCBI Gene 数据库查询获得人SHIP1 基因CDS区，插至载体pTSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP，构建SHIP1 真核过表达质粒；进一步利用其构建SHIP1 过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1 和PC-9 细胞株，获得SHIP1 稳定过表达NSCLC细胞系。Western blotting 和qRT-PCR分别从蛋白水平和mRNA水平检测SHIP1 的表达变化。采用MTT法和克隆形成实验检测过表达SHIP1 的PC-9 细胞增殖活力和克隆形成能力。Western blotting检测AP-1 蛋白复合体各组分的表达。结果：SHIP1 真核过表达质粒经测序证实构建成功。稳定过表达SHIP1 的A549、SPCA-1 和PC-9 细胞，在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与阴性对照组比较，细胞中SHIP1 在mRNA（P<0.01）及蛋白水平均明显升高。在PC-9 细胞中，过表达SHIP1 使细胞增殖、克隆形成能力降低（均P<0.01），p-c-Jun、FosB 等表达降低。结论：成功构建了稳定过表达SHIP1 的A549、SPCA-1和PC-9 细胞模型；过表达SHIP1可通过抑制AP-1 家族蛋白抑制NSCLC细胞增殖能力。
2018, 25(7):687-692.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.005
摘要:
目的：探讨木香烃内酯（costunolide，Cos）对人肝内胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法：以不同质量浓度（0、2、4、6、8、12、16、20 μg/ml）Cos 作用RBE细胞，通过CCK-8 法、流式细胞术分别检测Cos 对细胞增殖能力和周期分布的影响，Annexin V-FITC/PI 双染法、Transwell 小室实验分别检测Cos 对细胞凋亡和迁移侵袭的影响，qRT-PCR检测与侵袭相关因子MMP2、MMP9 mRNA的表达，Western blotting 检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果：Cos 能够显著抑制RBE细胞的增殖活性（P<0.05 或P<0.01)，阻滞细胞周期于S、G2/M期，同时诱导RBE细胞的凋亡(P<0.01)、且呈质量浓度依赖性，Transwell及qRT-PCR 结果显示Cos 能够显著抑制RBE 细胞的侵袭能力、降低侵袭相关转录因子MMP2 和MMP9 mRNA的表达，Western blotting 结果显示Cos 明显抑制p-AKT、Bcl-2、MMP2 及MMP9 的表达，但促进Bax 的表达。结论：Cos 通过抑制PI3K/AKT信号通路降低胆管癌RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力。
目的：探讨木香烃内酯（costunolide，Cos）对人肝内胆管癌RBE细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法：以不同质量浓度（0、2、4、6、8、12、16、20 μg/ml）Cos 作用RBE细胞，通过CCK-8 法、流式细胞术分别检测Cos 对细胞增殖能力和周期分布的影响，Annexin V-FITC/PI 双染法、Transwell 小室实验分别检测Cos 对细胞凋亡和迁移侵袭的影响，qRT-PCR检测与侵袭相关因子MMP2、MMP9 mRNA的表达，Western blotting 检测PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。结果：Cos 能够显著抑制RBE细胞的增殖活性（P<0.05 或P<0.01)，阻滞细胞周期于S、G2/M期，同时诱导RBE细胞的凋亡(P<0.01)、且呈质量浓度依赖性，Transwell及qRT-PCR 结果显示Cos 能够显著抑制RBE 细胞的侵袭能力、降低侵袭相关转录因子MMP2 和MMP9 mRNA的表达，Western blotting 结果显示Cos 明显抑制p-AKT、Bcl-2、MMP2 及MMP9 的表达，但促进Bax 的表达。结论：Cos 通过抑制PI3K/AKT信号通路降低胆管癌RBE细胞的增殖、迁移及侵袭能力。
2018, 25(7):693-697.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.006
摘要:
目的：观察TIM-3 在NK/T细胞淋巴瘤（natural killer/T cell lymphoma, NK/TCL）细胞株中的表达及其配体galectin-9（GAL-9）诱导瘤细胞凋亡的作用及其部分机制。方法：Western blotting 测定NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6、SNT-8 和健康人外周血NK细胞中TIM-3 的表达；采用不同质量浓度重组人GAL-9（rhGAL-9）作用于NK/TCL细胞株24 h 后，通过CCK-8 法检测细胞增殖活性；流式细胞术Annexin-V/PI 双染法检测瘤细胞凋亡；Western blotting 检测caspase-3、PARP及其剪接体和MAPK信号通路蛋白磷酸化表达水平变化。结果：NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6 和SNT-8 的TIM-3 表达较健康人外周血NK细胞显著增高，其中SNK-1、SNK-6 细胞株与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）；CCK-8 检测结果显示，rhGAL-9 对NK/TCL细胞增殖活力具有明显抑制作用，并有浓度依赖性；流式细胞术检测显示，rhGAL-9 可诱导3 种NK/TCL细胞株凋亡；Western blotting 结果显示，cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达量增高，MAPK通路中JNK蛋白磷酸化水平升高。结论：TIM-3 在NK/TCL细胞株中异常高表达，其配体GAL-9可诱导细胞凋亡，其机制可能与JNK磷酸化水平升高相关。
目的：观察TIM-3 在NK/T细胞淋巴瘤（natural killer/T cell lymphoma, NK/TCL）细胞株中的表达及其配体galectin-9（GAL-9）诱导瘤细胞凋亡的作用及其部分机制。方法：Western blotting 测定NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6、SNT-8 和健康人外周血NK细胞中TIM-3 的表达；采用不同质量浓度重组人GAL-9（rhGAL-9）作用于NK/TCL细胞株24 h 后，通过CCK-8 法检测细胞增殖活性；流式细胞术Annexin-V/PI 双染法检测瘤细胞凋亡；Western blotting 检测caspase-3、PARP及其剪接体和MAPK信号通路蛋白磷酸化表达水平变化。结果：NK/TCL细胞株SNK-1、SNK-6 和SNT-8 的TIM-3 表达较健康人外周血NK细胞显著增高，其中SNK-1、SNK-6 细胞株与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）；CCK-8 检测结果显示，rhGAL-9 对NK/TCL细胞增殖活力具有明显抑制作用，并有浓度依赖性；流式细胞术检测显示，rhGAL-9 可诱导3 种NK/TCL细胞株凋亡；Western blotting 结果显示，cleaved-caspase-3、cleaved-PARP蛋白表达量增高，MAPK通路中JNK蛋白磷酸化水平升高。结论：TIM-3 在NK/TCL细胞株中异常高表达，其配体GAL-9可诱导细胞凋亡，其机制可能与JNK磷酸化水平升高相关。
2018, 25(7):698-703.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.007
摘要:
目的：研究微小RNA-1180-5p（miR-1180-5p）对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法：合成dsControl （dsControl 组）和miR-1180-5p（miR-1180-5p 组），分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR 和Western blotting 分析转染后各组细胞CDKN1A、Cyclin D1 和CDK6 mRNA及蛋白的表达变化，采用流式细胞术、MTT法、平板克隆实验和Transwell 实验分别检测细胞周期分布、增殖活力、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭能力。结果：qPCR结果显示，相比dsControl，转染miR-1180-5p 后VCAP 和LNCaP 细胞中CDKN1A mRNA 表达明显上调(P<0.01)；Cyclin D1 和CDK6 mRNA表达明显下调(P<0.05 或P<0.01)。Western blotting 与qPCR 结果相符。转染miR-1180-5p 后VCAP和LNCaP 位于G0/G1 期的细胞比例增加(P<0.01)，而位于S 期和G2/M期的细胞比例减少(P<0.05)，细胞周期被阻滞在G0/G1 期。转染miR-1180-5p 后，两种前列腺癌细胞增殖活力较dsControl 组明显降低(P<0.05)，miR-1180-5p 组两种细胞的克隆数量明显较少（P<0.01），同时miR-1180-5p 组两组细胞迁移和侵袭能力均下降（P<0.01）。结论：miR-1180-5p 能显著激活前列腺癌细胞中CDKN1A基因的表达，从而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物行为。
目的：研究微小RNA-1180-5p（miR-1180-5p）对前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP恶性生物行为的影响及可能的作用机制。方法：合成dsControl （dsControl 组）和miR-1180-5p（miR-1180-5p 组），分别转染至两个前列腺癌细胞株VCAP和LNCaP。采用qPCR 和Western blotting 分析转染后各组细胞CDKN1A、Cyclin D1 和CDK6 mRNA及蛋白的表达变化，采用流式细胞术、MTT法、平板克隆实验和Transwell 实验分别检测细胞周期分布、增殖活力、克隆形成能力、细胞迁移和侵袭能力。结果：qPCR结果显示，相比dsControl，转染miR-1180-5p 后VCAP 和LNCaP 细胞中CDKN1A mRNA 表达明显上调(P<0.01)；Cyclin D1 和CDK6 mRNA表达明显下调(P<0.05 或P<0.01)。Western blotting 与qPCR 结果相符。转染miR-1180-5p 后VCAP和LNCaP 位于G0/G1 期的细胞比例增加(P<0.01)，而位于S 期和G2/M期的细胞比例减少(P<0.05)，细胞周期被阻滞在G0/G1 期。转染miR-1180-5p 后，两种前列腺癌细胞增殖活力较dsControl 组明显降低(P<0.05)，miR-1180-5p 组两种细胞的克隆数量明显较少（P<0.01），同时miR-1180-5p 组两组细胞迁移和侵袭能力均下降（P<0.01）。结论：miR-1180-5p 能显著激活前列腺癌细胞中CDKN1A基因的表达，从而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物行为。
2018, 25(7):704-710.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.008
摘要:
目的：探索miR-149-3p 对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及其机制。方法: HeLa 细胞随机分为5组：未转染(HeLa)组、mimic-scramble 组、miR-149 mimic 组、FOXP3 过表达(pc-FOXP3)组、共转染(mimic+pc-FOXP3)组，Mimicscramble为miR-149 mimic 的阴性对照随机序列。荧光素酶实验验证miR-149-3p 与FOXP3 的靶向结合关系。实时定量PCR(qRT-PCR)检测HeLa 细胞中miR-149-3p 表达及FOXP3 的mRNA水平，Western blotting 检测FOXP3 的蛋白水平。CCK-8 检测细胞增殖，流式细胞术分析细胞凋亡，Transwell 实验检测细胞侵袭，划痕实验分析细胞迁移。结果: 荧光素酶实验显示miR-149-3p可靶向结合FOXP3。与未转染组相比miR-149 mimic 组miR-149-3p 表达升高、FOXP3 mRNA水平下降(P<0.01)，而且miR-149mimic 组FOXP3 蛋白水平低于未转染组(P<0.01)、pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平高于未转染组(P<0.01)，与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平降低(P<0.01)。miR-149 mimic 组细HeLa 胞增殖倍数低于未转染组(P<0.01)，pc-FOXP3 组细胞增殖倍数高于未转染组(P<0.01)，与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组细胞增殖倍数下降(P<0.01)；miR-149 mimic 组HeLa 细胞凋亡率高于未转染组(P<0.01)，pc-FOXP3 组细胞凋亡率低于未转染组(P<0.01)，与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3组细胞凋亡率上升(P<0.01)；miR-149 mimic 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于未转染组(P<0.01)，pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率高于未转染组(P<0.01)，与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降(P<0.01)。结论：miR-149-3p 通过靶向FOXP3 抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移，同时促进细胞凋亡。
目的：探索miR-149-3p 对宫颈癌HeLa 细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响及其机制。方法: HeLa 细胞随机分为5组：未转染(HeLa)组、mimic-scramble 组、miR-149 mimic 组、FOXP3 过表达(pc-FOXP3)组、共转染(mimic+pc-FOXP3)组，Mimicscramble为miR-149 mimic 的阴性对照随机序列。荧光素酶实验验证miR-149-3p 与FOXP3 的靶向结合关系。实时定量PCR(qRT-PCR)检测HeLa 细胞中miR-149-3p 表达及FOXP3 的mRNA水平，Western blotting 检测FOXP3 的蛋白水平。CCK-8 检测细胞增殖，流式细胞术分析细胞凋亡，Transwell 实验检测细胞侵袭，划痕实验分析细胞迁移。结果: 荧光素酶实验显示miR-149-3p可靶向结合FOXP3。与未转染组相比miR-149 mimic 组miR-149-3p 表达升高、FOXP3 mRNA水平下降(P<0.01)，而且miR-149mimic 组FOXP3 蛋白水平低于未转染组(P<0.01)、pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平高于未转染组(P<0.01)，与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组FOXP3 蛋白水平降低(P<0.01)。miR-149 mimic 组细HeLa 胞增殖倍数低于未转染组(P<0.01)，pc-FOXP3 组细胞增殖倍数高于未转染组(P<0.01)，与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组细胞增殖倍数下降(P<0.01)；miR-149 mimic 组HeLa 细胞凋亡率高于未转染组(P<0.01)，pc-FOXP3 组细胞凋亡率低于未转染组(P<0.01)，与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3组细胞凋亡率上升(P<0.01)；miR-149 mimic 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率低于未转染组(P<0.01)，pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率高于未转染组(P<0.01)，与pc-FOXP3 组相比mimic+pc-FOXP3 组每个视野下的侵袭细胞数和划痕愈合率下降(P<0.01)。结论：miR-149-3p 通过靶向FOXP3 抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭和迁移，同时促进细胞凋亡。
2018, 25(7):711-715.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.009
摘要:
目的：探讨在人宫颈癌Caski 细胞中抑制多胺调节因子-1（polyamine-modulated factor, PMF-1）表达对糖皮质激素类药物地塞米松(dexamethasone, DEX）抗肿瘤作用的影响。方法: 设计合成靶向人PMF-1 基因的siRNA，Western blotting 法鉴定其对Caski 细胞PMF-1 中表达的影响。用DEX处理PMF-1 表达抑制的Caski 细胞和对照细胞，然后分析PMF-1 表达下调是否影响瘤细胞对DEX的敏感性。MTT法检测细胞增殖，流式细胞术分析细胞周期，Western blotting 法测定糖皮质激素受体（glucocorticoids receptor, GR）的表达水平，高效液相色谱法分析细胞内的多胺含量。结果: 用靶向PMF-1 基因的siRNA 瞬时转染Caski 细胞能显著性下调细胞中PMF-1 蛋白的表达水平。与对照细胞相比，用DEX处理PMF-1 表达下调的Caski 细胞能更有效地抑制细胞增殖(P<0.01)，上调细胞内GR表达水平(P<0.01)，并显著抑制细胞分裂导致G2 周期阻滞(P<0.01)，同时能显著性地降低细胞内的多胺水平(P<0.01)。结论: 抑制PMF-1 表达可增强DEX对人宫颈癌细胞的抗肿瘤活性，其机制可能与降低细胞内多胺水平和增强细胞周期阻滞相关。
目的：探讨在人宫颈癌Caski 细胞中抑制多胺调节因子-1（polyamine-modulated factor, PMF-1）表达对糖皮质激素类药物地塞米松(dexamethasone, DEX）抗肿瘤作用的影响。方法: 设计合成靶向人PMF-1 基因的siRNA，Western blotting 法鉴定其对Caski 细胞PMF-1 中表达的影响。用DEX处理PMF-1 表达抑制的Caski 细胞和对照细胞，然后分析PMF-1 表达下调是否影响瘤细胞对DEX的敏感性。MTT法检测细胞增殖，流式细胞术分析细胞周期，Western blotting 法测定糖皮质激素受体（glucocorticoids receptor, GR）的表达水平，高效液相色谱法分析细胞内的多胺含量。结果: 用靶向PMF-1 基因的siRNA 瞬时转染Caski 细胞能显著性下调细胞中PMF-1 蛋白的表达水平。与对照细胞相比，用DEX处理PMF-1 表达下调的Caski 细胞能更有效地抑制细胞增殖(P<0.01)，上调细胞内GR表达水平(P<0.01)，并显著抑制细胞分裂导致G2 周期阻滞(P<0.01)，同时能显著性地降低细胞内的多胺水平(P<0.01)。结论: 抑制PMF-1 表达可增强DEX对人宫颈癌细胞的抗肿瘤活性，其机制可能与降低细胞内多胺水平和增强细胞周期阻滞相关。
2018, 25(7):716-720.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.010
摘要:
目的：探讨FOXO3a 在缺氧诱导骨肉瘤细胞顺铂（cisplatin，DDP）耐药中的作用。方法：利用RT-PCR和Western blotting方法检测人骨肉瘤细胞U-2OS在常氧及缺氧条件下FOXO3a 的表达水平，Western blotting 检测转染FOXO3a-siRNA 和HIF-1α-siRNA 对细胞内FOXO3a 和HIF-1α 表达的影响，CCK-8 和Annexin V/PI 染色法检测FOXO3a 在缺氧诱导骨肉瘤细胞DDP耐药中的作用。结果：缺氧可使人骨肉瘤细胞U-2OS中FOXO3a mRNA和蛋白表达升高（均P<0.05）。FOXO3a 的表达受HIF-1α调控，与正常细胞组和转染阴性序列HIF-1α-NC组相比，HIF-1α-siRNA 组FOXO3a 蛋白表达量均显著降低[(0.38±0.03) vs (0.89±0.08)，(0.91±0.07)，均P<0.01]。在缺氧条件下，FOXO3a-siRNA 可降低U-2OS 细胞对DDP 的耐受性[(38.50±2.83)% vs (61.75±5.73)%，P<0.01]，增加DDP诱导的U-2OS细胞凋亡[(73.41±6.13)% vs (32.38±2.23)%, (55.89±4.46)%，均P<0.05]。结论：缺氧通过HIF-1α 依赖的方式诱导骨肉瘤细胞内FOXO3a 表达，从而增强瘤细胞对DPP的耐药性。
目的：探讨FOXO3a 在缺氧诱导骨肉瘤细胞顺铂（cisplatin，DDP）耐药中的作用。方法：利用RT-PCR和Western blotting方法检测人骨肉瘤细胞U-2OS在常氧及缺氧条件下FOXO3a 的表达水平，Western blotting 检测转染FOXO3a-siRNA 和HIF-1α-siRNA 对细胞内FOXO3a 和HIF-1α 表达的影响，CCK-8 和Annexin V/PI 染色法检测FOXO3a 在缺氧诱导骨肉瘤细胞DDP耐药中的作用。结果：缺氧可使人骨肉瘤细胞U-2OS中FOXO3a mRNA和蛋白表达升高（均P<0.05）。FOXO3a 的表达受HIF-1α调控，与正常细胞组和转染阴性序列HIF-1α-NC组相比，HIF-1α-siRNA 组FOXO3a 蛋白表达量均显著降低[(0.38±0.03) vs (0.89±0.08)，(0.91±0.07)，均P<0.01]。在缺氧条件下，FOXO3a-siRNA 可降低U-2OS 细胞对DDP 的耐受性[(38.50±2.83)% vs (61.75±5.73)%，P<0.01]，增加DDP诱导的U-2OS细胞凋亡[(73.41±6.13)% vs (32.38±2.23)%, (55.89±4.46)%，均P<0.05]。结论：缺氧通过HIF-1α 依赖的方式诱导骨肉瘤细胞内FOXO3a 表达，从而增强瘤细胞对DPP的耐药性。
2018, 25(7):721-725.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.011
摘要:
目的：构建hsa-microRNA-224(miR-224)过表达慢病毒载体，建立稳定过表达miR-224 的胰腺黏液性囊腺癌MCC1 细胞株。方法：设计miR-224 前体过表达基因片段,应用qRT-PCR 法扩增目的基因片段,通过基因重组技术将目的基因片段插入GV369 慢病毒载体中,进行PCR鉴定及DNA测序比对分析。用GV369-miR-224 慢病毒感染胰腺黏液性囊腺癌MCC1 细胞,建立稳定过表达miR-224 的MCC1 细胞株。荧光显微镜下观察GV369-NC及GV369-miR-224 慢病毒表达载体的转染效果,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCC1、GV369-miR-224-MCC1 和GV369-NC-MCC1 组细胞中miR-224 的表达水平。结果：成功构建GV369-miR-224 慢病毒表达载体质粒。GV369-miR-224-MCC1、GV369-NC-MCC1 细胞在荧光显微镜下均发出绿色荧光。miR-224 表达水平在GV369-miR-224-MCC1 细胞中显著高于阴性对照GV369-NC-MCC1 细胞和空白对照MCC1 细胞(23.45±1.94 vs 2.11±0.38,1.46±0.11，均P<0.01)，而两组对照组之间miR-224 表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：成功构建稳定过表达miR-224 的胰腺黏液性囊腺癌MCC1细胞株，为探讨miR-224在胰腺黏液性囊腺癌中的功能及发病机制提供新的细胞模型。
目的：构建hsa-microRNA-224(miR-224)过表达慢病毒载体，建立稳定过表达miR-224 的胰腺黏液性囊腺癌MCC1 细胞株。方法：设计miR-224 前体过表达基因片段,应用qRT-PCR 法扩增目的基因片段,通过基因重组技术将目的基因片段插入GV369 慢病毒载体中,进行PCR鉴定及DNA测序比对分析。用GV369-miR-224 慢病毒感染胰腺黏液性囊腺癌MCC1 细胞,建立稳定过表达miR-224 的MCC1 细胞株。荧光显微镜下观察GV369-NC及GV369-miR-224 慢病毒表达载体的转染效果,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCC1、GV369-miR-224-MCC1 和GV369-NC-MCC1 组细胞中miR-224 的表达水平。结果：成功构建GV369-miR-224 慢病毒表达载体质粒。GV369-miR-224-MCC1、GV369-NC-MCC1 细胞在荧光显微镜下均发出绿色荧光。miR-224 表达水平在GV369-miR-224-MCC1 细胞中显著高于阴性对照GV369-NC-MCC1 细胞和空白对照MCC1 细胞(23.45±1.94 vs 2.11±0.38,1.46±0.11，均P<0.01)，而两组对照组之间miR-224 表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论：成功构建稳定过表达miR-224 的胰腺黏液性囊腺癌MCC1细胞株，为探讨miR-224在胰腺黏液性囊腺癌中的功能及发病机制提供新的细胞模型。
2018, 25(7):726-732.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.012
摘要:
目的：探讨环状RNA（circRNA) ciRS-7 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）组织中的表达及对ESCC细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选取河北医科大学第四医院2016 年5 月至2017 年4 月收治的60 例食管癌患者病理组织标本及配对癌旁组织，通过qRT-PCR 检测ciRS-7 的表达水平。过表达或者敲低ciRS-7 后，采用CCK-8 法检测ESCC细胞株TE1 的增殖情况，同时采用划痕实验和Transwell 实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。最后通过动物实验在体内进行验证。结果：ciRS-7 在ESCC组织中高表达，且表达水平与病理分级和淋巴结转移有关（均P<0.05）。过表达ciRS-7 后，ESCC细胞株TE1 的增殖、迁移和侵袭能力显著升高（均P<0.05）；沉默ciRS-7 后，TE1 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低（均P<0.05）。动物实验结果显示，转染ciRS-7 表达质粒组裸鼠的肿瘤体积和质量均明显高于空载体组（均P<0.05）。免疫组化检测结果表明，转染ciRS-7 表达质粒组裸鼠的肿瘤组织中增殖相关抗原(ki67、PCNA)、转移相关抗原(MMP2、MMP9)表达明显高于空载体组（均P<0.05）。结论：ciRS-7 在食管癌组织中表达上调，并且会增强食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，提示ciRS-7 可以作为诊断和治疗食管鳞状细胞癌的潜在作用靶点。
目的：探讨环状RNA（circRNA) ciRS-7 在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma，ESCC）组织中的表达及对ESCC细胞株增殖、迁移和侵袭的影响。方法：选取河北医科大学第四医院2016 年5 月至2017 年4 月收治的60 例食管癌患者病理组织标本及配对癌旁组织，通过qRT-PCR 检测ciRS-7 的表达水平。过表达或者敲低ciRS-7 后，采用CCK-8 法检测ESCC细胞株TE1 的增殖情况，同时采用划痕实验和Transwell 实验分别检测细胞迁移和侵袭能力的变化。最后通过动物实验在体内进行验证。结果：ciRS-7 在ESCC组织中高表达，且表达水平与病理分级和淋巴结转移有关（均P<0.05）。过表达ciRS-7 后，ESCC细胞株TE1 的增殖、迁移和侵袭能力显著升高（均P<0.05）；沉默ciRS-7 后，TE1 细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低（均P<0.05）。动物实验结果显示，转染ciRS-7 表达质粒组裸鼠的肿瘤体积和质量均明显高于空载体组（均P<0.05）。免疫组化检测结果表明，转染ciRS-7 表达质粒组裸鼠的肿瘤组织中增殖相关抗原(ki67、PCNA)、转移相关抗原(MMP2、MMP9)表达明显高于空载体组（均P<0.05）。结论：ciRS-7 在食管癌组织中表达上调，并且会增强食管癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，提示ciRS-7 可以作为诊断和治疗食管鳞状细胞癌的潜在作用靶点。
2018, 25(7):733-736.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.013
摘要:
[摘要] 免疫检查点通过双信号机制调控肿瘤微环境中最主要的免疫细胞——T淋巴细胞的免疫应答活性而发挥作用。这些分子主要分为两类，一类是免疫球蛋白（immune globulin, Ig）超家族，另一类是肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）配体/受体对。随着研究的深入，新的免疫检查点靶点不断涌现，其中，CD40、CD27、4-1BB、OX40 及VISTA等在实体瘤治疗中具有良好前景。负向免疫检查点(negative checkpoint regulators, NCRs)也逐渐受到重视，更多新兴免疫检查点分子正在临床试验阶段，低反应率及耐药性是新靶点研究的瓶颈。本文就免疫检查点靶点的特点、部分研究中的免疫检查点新靶点、新兴免疫检查点靶点研究前景与挑战等热点问题作一综述。
[摘要] 免疫检查点通过双信号机制调控肿瘤微环境中最主要的免疫细胞——T淋巴细胞的免疫应答活性而发挥作用。这些分子主要分为两类，一类是免疫球蛋白（immune globulin, Ig）超家族，另一类是肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor，TNF）配体/受体对。随着研究的深入，新的免疫检查点靶点不断涌现，其中，CD40、CD27、4-1BB、OX40 及VISTA等在实体瘤治疗中具有良好前景。负向免疫检查点(negative checkpoint regulators, NCRs)也逐渐受到重视，更多新兴免疫检查点分子正在临床试验阶段，低反应率及耐药性是新靶点研究的瓶颈。本文就免疫检查点靶点的特点、部分研究中的免疫检查点新靶点、新兴免疫检查点靶点研究前景与挑战等热点问题作一综述。
2018, 25(7):737-741.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.014
摘要:
[摘要]免疫检查点为T 细胞提供抑制信号，造成肿瘤细胞免疫逃，为肿瘤治疗提供了全新的理念。程序性死亡受体（programmed cell death-1，PD-1）/程序性死亡受体配体-1（programmed death legend 1，PD-L1）成为最具发展前景的靶点,PD-1/PD-L1抗体在治疗黑色素瘤和非小细胞肺癌（NSCLC）中表现出显著的抗瘤效应和良好的安全性。在进展期胃癌患者外周血以及癌组织中PD-L1 均高表达，与多种病理特征存在一定正相关，往往是患者不良预后的预测指标。相关临床试验表明，应用PD-1/PD-L1抗体可使胃癌或胃食管交界癌患者受益，且无不可耐受副反应发生。而多种因素均与PD-1/PD-L1 表达相关，若调节这些因素的药物与PD-1/PD-L1 抑制剂联合应用，将有可能进一步提高胃癌的疗效。
[摘要]免疫检查点为T 细胞提供抑制信号，造成肿瘤细胞免疫逃，为肿瘤治疗提供了全新的理念。程序性死亡受体（programmed cell death-1，PD-1）/程序性死亡受体配体-1（programmed death legend 1，PD-L1）成为最具发展前景的靶点,PD-1/PD-L1抗体在治疗黑色素瘤和非小细胞肺癌（NSCLC）中表现出显著的抗瘤效应和良好的安全性。在进展期胃癌患者外周血以及癌组织中PD-L1 均高表达，与多种病理特征存在一定正相关，往往是患者不良预后的预测指标。相关临床试验表明，应用PD-1/PD-L1抗体可使胃癌或胃食管交界癌患者受益，且无不可耐受副反应发生。而多种因素均与PD-1/PD-L1 表达相关，若调节这些因素的药物与PD-1/PD-L1 抑制剂联合应用，将有可能进一步提高胃癌的疗效。
2018, 25(7):742-746.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.015
摘要:
[摘要]在天然免疫应答尤其是抗病毒天然免疫应答中，维甲酸诱导基因-I（retinoic acid inducible gene I,RIG-I）是重要的胞内病毒RNA模式识别受体，其通过结合和识别病毒来源的RNA进而活化下游RIG-I 信号通路，从而激发炎症因子和I 型干扰素的表达，实现抗病毒天然免疫应答的启动。然而，新近研究表明，在肿瘤发生发展的过程中，RIG-I 亦可发挥重要的调控作用。在肿瘤进展的不同病理阶段，RIG-I 可发挥抑制或促进肿瘤进展的功能。本文就RIG-I 在不同肿瘤及其发生发展不同阶段所发挥的抑癌基因或促癌基因样作用的研究进展作一综述。
[摘要]在天然免疫应答尤其是抗病毒天然免疫应答中，维甲酸诱导基因-I（retinoic acid inducible gene I,RIG-I）是重要的胞内病毒RNA模式识别受体，其通过结合和识别病毒来源的RNA进而活化下游RIG-I 信号通路，从而激发炎症因子和I 型干扰素的表达，实现抗病毒天然免疫应答的启动。然而，新近研究表明，在肿瘤发生发展的过程中，RIG-I 亦可发挥重要的调控作用。在肿瘤进展的不同病理阶段，RIG-I 可发挥抑制或促进肿瘤进展的功能。本文就RIG-I 在不同肿瘤及其发生发展不同阶段所发挥的抑癌基因或促癌基因样作用的研究进展作一综述。
2018, 25(7):747-751.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2018.07.016
摘要:
[摘要] 个体化多肽疫苗（personalized peptide vaccines，PPVs）是指根据肿瘤患者的个体遗传基因结构和功能差异，从一系列候选多肽中选出至多４种与人类白细胞抗原A1 亚型（HLA-A1）匹配的多肽，制作成的肿瘤疫苗。与常规多肽疫苗相比较，PPVs能诱导更强大和更快捷的抗肿瘤免疫力。现有临床研究结果显示，PPVs 在去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer，CRPC)免疫治疗中具有良好的应用前景，可明显改善无进展生存期和总体生存期。目前，PPVs仍处于临床研究阶段，与真正的临床应用尚存在一定距离，对于治疗对象的选择、疗效的评估以及联合用药的价值等问题均有待进一步的探索。
[摘要] 个体化多肽疫苗（personalized peptide vaccines，PPVs）是指根据肿瘤患者的个体遗传基因结构和功能差异，从一系列候选多肽中选出至多４种与人类白细胞抗原A1 亚型（HLA-A1）匹配的多肽，制作成的肿瘤疫苗。与常规多肽疫苗相比较，PPVs能诱导更强大和更快捷的抗肿瘤免疫力。现有临床研究结果显示，PPVs 在去势抵抗性前列腺癌(castration-resistant prostate cancer，CRPC)免疫治疗中具有良好的应用前景，可明显改善无进展生存期和总体生存期。目前，PPVs仍处于临床研究阶段，与真正的临床应用尚存在一定距离，对于治疗对象的选择、疗效的评估以及联合用药的价值等问题均有待进一步的探索。
联系方式
- 《中国肿瘤生物治疗杂志》
- 1994年创刊
- 主办单位：中国免疫学会、中国抗癌学会
- 邮编：200433
- 电话：021-81871002-22
- 电子邮箱：cjcb@biother.cn
- 网址:http://www.biother.cn
- 刊号：ISSN 1007-385X
- CN 31-1725/R
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