2020年第27卷第3期文章目次
2020, 27(3):213-220.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.001
摘要:
肿瘤免疫治疗的新策略发展迅速，已经成为肿瘤治疗最受瞩目的领域。关于如何实现最理想抗肿瘤免疫效果，可采用“被动”免疫疗法如过继性细胞疗法、基因工程T细胞等直接攻击肿瘤细胞，也可采用“主动”免疫疗法如细胞因子、肿瘤疫苗、免疫检查点抑制剂等调节并激活免疫系统。原位疫苗以局部瘤内注射的方式，将“主动”和“被动”免疫科学地结合起来，在直接抑制肿瘤细胞的同时深度调节和触发机体免疫系统，形成免疫启动-免疫效应-肿瘤细胞死亡-抗原释放导致免疫再启动-免疫再效应的反复循环，最大限度地发挥抗肿瘤免疫效果。本文就原位疫苗的具体策略、临床前研究和临床试验的进展，以及原位疫苗的优势、存在问题和应对策略等展开讨论。
肿瘤免疫治疗的新策略发展迅速，已经成为肿瘤治疗最受瞩目的领域。关于如何实现最理想抗肿瘤免疫效果，可采用“被动”免疫疗法如过继性细胞疗法、基因工程T细胞等直接攻击肿瘤细胞，也可采用“主动”免疫疗法如细胞因子、肿瘤疫苗、免疫检查点抑制剂等调节并激活免疫系统。原位疫苗以局部瘤内注射的方式，将“主动”和“被动”免疫科学地结合起来，在直接抑制肿瘤细胞的同时深度调节和触发机体免疫系统，形成免疫启动-免疫效应-肿瘤细胞死亡-抗原释放导致免疫再启动-免疫再效应的反复循环，最大限度地发挥抗肿瘤免疫效果。本文就原位疫苗的具体策略、临床前研究和临床试验的进展，以及原位疫苗的优势、存在问题和应对策略等展开讨论。
2020, 27(3):221-227.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.002
摘要:
目的：探讨使用CRSIPR/Cas9 技术删除CTL的免疫检查点CTLA-4 后CTL的抗裸鼠结肠癌移植瘤的效果及其作用机制。方法：针对CTLA-4 设计特异性小向导RNA(small guide RNA，sgRNA)并构建sgRNA/Cas9 质粒，使用慢病毒载体转染质粒至CTL获得删除CTLA-4 的CTL（CTLA-4 KOCTL），并验证质粒的转染效率和CTLA-4 的删除效率。BALB/c裸鼠随机分为2 组进行实验，预防性注射CTLA-4 KO CTL（实验组）及CTL（对照组），3 d 后接种结肠癌细胞株LS174-T，观察成瘤率及成瘤时间。建立结肠癌移植瘤裸鼠模型，成瘤后裸鼠随机分为2 组，分别给予CTLA-4 KO CTL（实验组）及CTL（对照组）进行细胞治疗，观察移植瘤的体积、裸鼠的生存时间，并检测移植瘤裸鼠血清中TNF-α 及IFN-γ 分泌水平。结果：设计sgRNA并成功构建以慢病毒为载体的CRSIPR/Cas9 系统，使用构建好的CRSIPR/Cas9 系统转染CTL细胞，转染效率最高可达（28.80±0.62)%，转染后以流式细胞术检测CTLA-4 的删除效率，CTLA-4 KO CTL 组的CTLA-4 表达较CTL 组显著降低[ （0.91±0.25）% vs（42.70±2.72）%，P<0.01]。预防实验中，实验组结肠癌移植瘤发生率明显低于对照组（33.33% vs 100.00%，P<0.01）。治疗实验中，实验组肿瘤体积较对照组显著减少[ （503.0±23.9）vs（911.2±51.4）mm3，P<0.05]，实验组裸鼠相较于对照组生存时间明显延长（中位生存期：78 vs 42 d，P<0.05），实验组裸鼠血清TNF-α（[ 268.93±17.04）vs（148.26±20.07）pg/ml，P<0.05]及IFN-γ（[ 315.38±18.67）vs (202.92±29.32) pg/ml，P<0.05]的分泌水平较对照组明显增高。结论：以CRSIPR/Cas9 技术成功删除CTL中免疫检查点CTLA-4 后可以显著抑制裸鼠结肠癌移植瘤的成瘤率、增强CTL对荷结肠癌裸鼠的抗肿瘤作用，并明显增高荷瘤鼠血清中TNF-α 和IFN-γ 水平。
目的：探讨使用CRSIPR/Cas9 技术删除CTL的免疫检查点CTLA-4 后CTL的抗裸鼠结肠癌移植瘤的效果及其作用机制。方法：针对CTLA-4 设计特异性小向导RNA(small guide RNA，sgRNA)并构建sgRNA/Cas9 质粒，使用慢病毒载体转染质粒至CTL获得删除CTLA-4 的CTL（CTLA-4 KOCTL），并验证质粒的转染效率和CTLA-4 的删除效率。BALB/c裸鼠随机分为2 组进行实验，预防性注射CTLA-4 KO CTL（实验组）及CTL（对照组），3 d 后接种结肠癌细胞株LS174-T，观察成瘤率及成瘤时间。建立结肠癌移植瘤裸鼠模型，成瘤后裸鼠随机分为2 组，分别给予CTLA-4 KO CTL（实验组）及CTL（对照组）进行细胞治疗，观察移植瘤的体积、裸鼠的生存时间，并检测移植瘤裸鼠血清中TNF-α 及IFN-γ 分泌水平。结果：设计sgRNA并成功构建以慢病毒为载体的CRSIPR/Cas9 系统，使用构建好的CRSIPR/Cas9 系统转染CTL细胞，转染效率最高可达（28.80±0.62)%，转染后以流式细胞术检测CTLA-4 的删除效率，CTLA-4 KO CTL 组的CTLA-4 表达较CTL 组显著降低[ （0.91±0.25）% vs（42.70±2.72）%，P<0.01]。预防实验中，实验组结肠癌移植瘤发生率明显低于对照组（33.33% vs 100.00%，P<0.01）。治疗实验中，实验组肿瘤体积较对照组显著减少[ （503.0±23.9）vs（911.2±51.4）mm3，P<0.05]，实验组裸鼠相较于对照组生存时间明显延长（中位生存期：78 vs 42 d，P<0.05），实验组裸鼠血清TNF-α（[ 268.93±17.04）vs（148.26±20.07）pg/ml，P<0.05]及IFN-γ（[ 315.38±18.67）vs (202.92±29.32) pg/ml，P<0.05]的分泌水平较对照组明显增高。结论：以CRSIPR/Cas9 技术成功删除CTL中免疫检查点CTLA-4 后可以显著抑制裸鼠结肠癌移植瘤的成瘤率、增强CTL对荷结肠癌裸鼠的抗肿瘤作用，并明显增高荷瘤鼠血清中TNF-α 和IFN-γ 水平。
2020, 27(3):228-234.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.003
摘要:
目的：探讨香加皮宝藿苷-Ⅰ对人结肠癌细胞株SW480 和RKO增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响，并对其机制进行初步的探讨。方法：用不同质量浓度（0、5、10、20 μg/ml）的香加皮宝藿苷-Ⅰ溶液分别处理结肠癌细胞株SW480 和RKO，采用MTT法检测细胞的增殖情况，通过细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，通过Transwell 方法检测细胞的迁移和侵袭能力，通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。通过Western blotting 检测C-PARP、Bcl-2 与caspase-3 蛋白的表达水平，通过RNA-seq 检测分析香加皮宝藿苷-Ⅰ对SW480 细胞转录组的影响及其可能影响的信号通路。结果：香加皮宝藿苷-Ⅰ能抑制SW480 和RKO细胞的增殖、侵袭和迁移，并且能够诱导细胞凋亡和阻滞于细胞G0/G1期。香加皮宝藿苷-Ⅰ处理可上调SW480 和RKO 细胞株中C-PARP与caspase-3 蛋白的表达水平、下调Bcl-2 蛋白的表达水平；RNA-seq数据分析显示，SW480 细胞DNA复制及ERBB信号通路等相关基因的转录都受到香加皮宝藿苷-Ⅰ的影响。结论：香加皮宝藿苷-Ⅰ通过影响凋亡相关蛋白的表达、细胞DNA复制和ERBB信号通路来诱导细胞凋亡和细胞G0/G1期阻滞，进而抑制人结肠癌细胞株SW480和RKO的恶性表型。
目的：探讨香加皮宝藿苷-Ⅰ对人结肠癌细胞株SW480 和RKO增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响，并对其机制进行初步的探讨。方法：用不同质量浓度（0、5、10、20 μg/ml）的香加皮宝藿苷-Ⅰ溶液分别处理结肠癌细胞株SW480 和RKO，采用MTT法检测细胞的增殖情况，通过细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，通过Transwell 方法检测细胞的迁移和侵袭能力，通过流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。通过Western blotting 检测C-PARP、Bcl-2 与caspase-3 蛋白的表达水平，通过RNA-seq 检测分析香加皮宝藿苷-Ⅰ对SW480 细胞转录组的影响及其可能影响的信号通路。结果：香加皮宝藿苷-Ⅰ能抑制SW480 和RKO细胞的增殖、侵袭和迁移，并且能够诱导细胞凋亡和阻滞于细胞G0/G1期。香加皮宝藿苷-Ⅰ处理可上调SW480 和RKO 细胞株中C-PARP与caspase-3 蛋白的表达水平、下调Bcl-2 蛋白的表达水平；RNA-seq数据分析显示，SW480 细胞DNA复制及ERBB信号通路等相关基因的转录都受到香加皮宝藿苷-Ⅰ的影响。结论：香加皮宝藿苷-Ⅰ通过影响凋亡相关蛋白的表达、细胞DNA复制和ERBB信号通路来诱导细胞凋亡和细胞G0/G1期阻滞，进而抑制人结肠癌细胞株SW480和RKO的恶性表型。
2020, 27(3):235-241.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.004
摘要:
目的：设计同时靶向B淋巴细胞表面CD20 和CD19 两个抗原蛋白的双特异嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）并制备BiCAR-T 细胞，检测其对B淋巴细胞肿瘤细胞的杀伤作用以及对免疫缺陷B-NSG 小鼠白血病模型的治疗效果。方法：构建基于鼠源CD19 和人源化CD20 scFv 的双靶点CAR分子，将CAR基因装载于慢病毒载体中，在293T细胞中包装慢病毒，感染健康人T 细胞制备BiCAR-T 细胞。构建表达CD19 和CD20 的K562-CD19-GFP、K562-CD20-GFP 以及表达Luciferase 的Nalm6-Luc-GFP 细胞作为靶细胞，将BiCAR-T 细胞与靶细胞共同孵育，检测其对靶细胞杀伤能力及释放IFN-γ 水平。使用Nalm6-Luc-GFP 细胞构建白血病小鼠模型，尾静脉注射BiCAR-T细胞，通过小动物成像方法观察BiCAR-T细胞对荷瘤小鼠的治疗作用。结果：健康人来源的BiCAR-T 细胞经7 d 培养后扩增良好，扩增倍数为20~50 倍，阳性率为10%~92%，显示成功制备BiCAR-T细胞。在效靶比为10∶1 时，BiCAR-T细胞对Nalm-6、K562-CD19-GFP 和K562-CD20-GFP 的杀伤率显著高于对照组细胞[ （76.7±7.4）% vs（8.7±2.4）%、（93.3±5.2）% vs（46.7±6.2）、（51.0±0.8）vs（30.7±0.5）%，均P<0.01]；与对照组相比，与Nalm-6细胞共孵育后BiCAR-T 细胞分泌IFN- γ 量显著增加[（872.7±7.7）vs（101.0±5.3）pg/ml ，P<0.01]。动物实验表明，BiCAR-T细胞对B-NSG小鼠白血病模型治疗效果明显，注射BiCAR-T细胞后白血病细胞逐渐减少，第50 天时基本消失，小鼠全部存活至第70 天被安乐死；PBS和对照T细胞组小鼠分别在（19±3）和（20±1）d 全部死亡。结论：成功设计了表达CD19 和CD20 的双靶点CAR分子后成功制备了BiCAR-T 细胞，该细胞能够有效杀伤表达CD19 和/或CD20 的B淋巴细胞肿瘤细胞，与靶细胞共同孵育后能够分泌大量IFN-γ，对B-NSG免疫缺陷小鼠白血病模型具有明显的治疗效果。
目的：设计同时靶向B淋巴细胞表面CD20 和CD19 两个抗原蛋白的双特异嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）并制备BiCAR-T 细胞，检测其对B淋巴细胞肿瘤细胞的杀伤作用以及对免疫缺陷B-NSG 小鼠白血病模型的治疗效果。方法：构建基于鼠源CD19 和人源化CD20 scFv 的双靶点CAR分子，将CAR基因装载于慢病毒载体中，在293T细胞中包装慢病毒，感染健康人T 细胞制备BiCAR-T 细胞。构建表达CD19 和CD20 的K562-CD19-GFP、K562-CD20-GFP 以及表达Luciferase 的Nalm6-Luc-GFP 细胞作为靶细胞，将BiCAR-T 细胞与靶细胞共同孵育，检测其对靶细胞杀伤能力及释放IFN-γ 水平。使用Nalm6-Luc-GFP 细胞构建白血病小鼠模型，尾静脉注射BiCAR-T细胞，通过小动物成像方法观察BiCAR-T细胞对荷瘤小鼠的治疗作用。结果：健康人来源的BiCAR-T 细胞经7 d 培养后扩增良好，扩增倍数为20~50 倍，阳性率为10%~92%，显示成功制备BiCAR-T细胞。在效靶比为10∶1 时，BiCAR-T细胞对Nalm-6、K562-CD19-GFP 和K562-CD20-GFP 的杀伤率显著高于对照组细胞[ （76.7±7.4）% vs（8.7±2.4）%、（93.3±5.2）% vs（46.7±6.2）、（51.0±0.8）vs（30.7±0.5）%，均P<0.01]；与对照组相比，与Nalm-6细胞共孵育后BiCAR-T 细胞分泌IFN- γ 量显著增加[（872.7±7.7）vs（101.0±5.3）pg/ml ，P<0.01]。动物实验表明，BiCAR-T细胞对B-NSG小鼠白血病模型治疗效果明显，注射BiCAR-T细胞后白血病细胞逐渐减少，第50 天时基本消失，小鼠全部存活至第70 天被安乐死；PBS和对照T细胞组小鼠分别在（19±3）和（20±1）d 全部死亡。结论：成功设计了表达CD19 和CD20 的双靶点CAR分子后成功制备了BiCAR-T 细胞，该细胞能够有效杀伤表达CD19 和/或CD20 的B淋巴细胞肿瘤细胞，与靶细胞共同孵育后能够分泌大量IFN-γ，对B-NSG免疫缺陷小鼠白血病模型具有明显的治疗效果。
2020, 27(3):242-247.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.005
摘要:
目的：研究涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma ，SACC）来源的外泌体（exosome，EXO）对成纤维细胞PD-L1分子表达的影响。方法：通过EXO分离试剂盒提取SACC-83细胞系来源的外泌体并以电镜鉴定其颗粒大小、密度和表型；使用PKH67荧光标记后将EXO与成纤维细胞HPLF共孵育，以共聚焦显微镜观察EXO可否被HPLF细胞摄取；将EXO与HPLF细胞共孵育后，全转录组测序检测筛查该细胞中差异表达基因，GO分析结合KEGG富集分析阐明差异表达基因涉及的生物学功能和相关信号通路；使用qPCR、Western blotting 和流式细胞术检测肿瘤EXO对HPLF细胞中PD-L1、LAG3 和IDO1 在mRNA与蛋白水平表达的影响。结果：SACC-83细胞源EXO特异性表达CD63、CD81和TSG101分子，并可被HPLF细胞内吞摄取；EXO处理HPLF细胞后，细胞中PD-L1 分子显著上调表达（Fold change=10.19），差异基因显著富集于TNF、NF-κB、cGAS-String 等免疫反应信号通路；体外实验证明EXO可以从mRNA和蛋白水平显著促进HPLF细胞中PD-L1 的表达（24.7±4.75 vs 1.03±0.11，P<0.05）。结论：涎腺腺样囊性癌SACC-83 细胞来源EXO可以促进HPLF细胞中免疫检查点配体PD-L1的表达。
目的：研究涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma ，SACC）来源的外泌体（exosome，EXO）对成纤维细胞PD-L1分子表达的影响。方法：通过EXO分离试剂盒提取SACC-83细胞系来源的外泌体并以电镜鉴定其颗粒大小、密度和表型；使用PKH67荧光标记后将EXO与成纤维细胞HPLF共孵育，以共聚焦显微镜观察EXO可否被HPLF细胞摄取；将EXO与HPLF细胞共孵育后，全转录组测序检测筛查该细胞中差异表达基因，GO分析结合KEGG富集分析阐明差异表达基因涉及的生物学功能和相关信号通路；使用qPCR、Western blotting 和流式细胞术检测肿瘤EXO对HPLF细胞中PD-L1、LAG3 和IDO1 在mRNA与蛋白水平表达的影响。结果：SACC-83细胞源EXO特异性表达CD63、CD81和TSG101分子，并可被HPLF细胞内吞摄取；EXO处理HPLF细胞后，细胞中PD-L1 分子显著上调表达（Fold change=10.19），差异基因显著富集于TNF、NF-κB、cGAS-String 等免疫反应信号通路；体外实验证明EXO可以从mRNA和蛋白水平显著促进HPLF细胞中PD-L1 的表达（24.7±4.75 vs 1.03±0.11，P<0.05）。结论：涎腺腺样囊性癌SACC-83 细胞来源EXO可以促进HPLF细胞中免疫检查点配体PD-L1的表达。
2020, 27(3):248-254.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.006
摘要:
目的：探讨miR-377-5p 与缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1，HIF-1α）的靶向关系以及通过控血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）信号通路对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞增殖、侵袭和EMT的调控作用。方法：qPCR检测35 例人HCC组织及癌旁组织标本中miR-377-5p 的表达水平。将HepG2 细胞分为对照组、mimic NC组、miR-377-5p mimic 组，qPCR 检测转染效率；EdU染色、Transwell 和Western blotting（WB）检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞增殖、侵袭及其增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）及上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）标志蛋白E-cadherin、N-cadherin 表达的影响；qPCR、WB检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞中，缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）表达的影响。荧光素酶报告基因实验验证miR-377-5p 与HIF-1α 基因的靶向关系。结果：HCC 组织中miR-377-5p 表达水平较癌旁组织降低（P<0.01）。与对照组相比，miR-377-5p mimic 组HepG2细胞中miR-377-5p 水平明显升高，细胞的增殖、侵袭能力降低（均P<0.01），EMT、N-cadherin 表达水平降低（均P<0.01）而E-cadherin 表达水平显著升高（P<0.01）；miR-377-5p mimic 组中HIF-1α mRNA 和蛋白表达水平均降低（P<0.01 或P<0.05）。miR-377-5p 靶向抑制HIF-1α 基因表达，并抑制VEGF通路的激活（均P<0.05）。结论：miR-377-5p 通过靶向抑制HIF-1α 基因表达和下调VEGF信号通路从而抑制HepG2 细胞的增殖、侵袭和EMT。
目的：探讨miR-377-5p 与缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1，HIF-1α）的靶向关系以及通过控血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）信号通路对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）细胞增殖、侵袭和EMT的调控作用。方法：qPCR检测35 例人HCC组织及癌旁组织标本中miR-377-5p 的表达水平。将HepG2 细胞分为对照组、mimic NC组、miR-377-5p mimic 组，qPCR 检测转染效率；EdU染色、Transwell 和Western blotting（WB）检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞增殖、侵袭及其增殖相关蛋白Ki-67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）及上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）标志蛋白E-cadherin、N-cadherin 表达的影响；qPCR、WB检测miR-377-5p 过表达对HepG2 细胞中，缺氧诱导因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）表达的影响。荧光素酶报告基因实验验证miR-377-5p 与HIF-1α 基因的靶向关系。结果：HCC 组织中miR-377-5p 表达水平较癌旁组织降低（P<0.01）。与对照组相比，miR-377-5p mimic 组HepG2细胞中miR-377-5p 水平明显升高，细胞的增殖、侵袭能力降低（均P<0.01），EMT、N-cadherin 表达水平降低（均P<0.01）而E-cadherin 表达水平显著升高（P<0.01）；miR-377-5p mimic 组中HIF-1α mRNA 和蛋白表达水平均降低（P<0.01 或P<0.05）。miR-377-5p 靶向抑制HIF-1α 基因表达，并抑制VEGF通路的激活（均P<0.05）。结论：miR-377-5p 通过靶向抑制HIF-1α 基因表达和下调VEGF信号通路从而抑制HepG2 细胞的增殖、侵袭和EMT。
2020, 27(3):255-260.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.007
摘要:
目的：探讨siRNA技术干扰胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factors-1 receptors, IGF-1R）表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期和凋亡的影响。方法：采用氯化钴处理制备实验所需的肝癌缺氧细胞模型。设计并合成3 对siRNA序列和1 对阴性对照序列，转染缺氧的肝癌HepG2 细胞24 h 后以荧光显微镜观察转染效果，采用WB法检测IGF-1R蛋白表达筛选出干扰效率最高的siRNA序列。选用该序列再次转染缺氧肝癌细胞，以流式细胞术、MTT法检测细胞的周期、凋亡和增殖变化，以WB法检测HepG2 细胞中CDK1、CDK2 和Caspase-3 蛋白的表达。结果：成功建立缺氧HepG2 细胞模型，siRNA转染缺氧HepG2 细胞后以IGF-1R-siRNA-2 转染效率最高且敲减IGF-1R表达最明显（均P<0.01）。IGF-1R-siRNA-2 转染的HepG2 细胞的增殖被明显抑制（P<0.05 或P<0.01）、细胞周期被阻滞在G0/G1（P<0.05）、细胞凋亡率明显增加至（25.3±1.3）%（P<0.01），同时发现敲减IGF-1R后缺氧HepG2 细胞中CDK1、CDK2 蛋白表达明显降低而Caspase-3 表达则明显增加（P<0.05或P<0.01）。结论：siRNA干扰IGF-1R表达通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白而抑制缺氧环境中HepG2细胞的恶性生物学行为，IGF-1R可能是HCC潜在的治疗靶点。
目的：探讨siRNA技术干扰胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factors-1 receptors, IGF-1R）表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期和凋亡的影响。方法：采用氯化钴处理制备实验所需的肝癌缺氧细胞模型。设计并合成3 对siRNA序列和1 对阴性对照序列，转染缺氧的肝癌HepG2 细胞24 h 后以荧光显微镜观察转染效果，采用WB法检测IGF-1R蛋白表达筛选出干扰效率最高的siRNA序列。选用该序列再次转染缺氧肝癌细胞，以流式细胞术、MTT法检测细胞的周期、凋亡和增殖变化，以WB法检测HepG2 细胞中CDK1、CDK2 和Caspase-3 蛋白的表达。结果：成功建立缺氧HepG2 细胞模型，siRNA转染缺氧HepG2 细胞后以IGF-1R-siRNA-2 转染效率最高且敲减IGF-1R表达最明显（均P<0.01）。IGF-1R-siRNA-2 转染的HepG2 细胞的增殖被明显抑制（P<0.05 或P<0.01）、细胞周期被阻滞在G0/G1（P<0.05）、细胞凋亡率明显增加至（25.3±1.3）%（P<0.01），同时发现敲减IGF-1R后缺氧HepG2 细胞中CDK1、CDK2 蛋白表达明显降低而Caspase-3 表达则明显增加（P<0.05或P<0.01）。结论：siRNA干扰IGF-1R表达通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白而抑制缺氧环境中HepG2细胞的恶性生物学行为，IGF-1R可能是HCC潜在的治疗靶点。
2020, 27(3):261-266.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.008
摘要:
目的：探讨RNA结合蛋白Lin28 对肝癌HepG2细胞5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的影响及其机制。方法：应用pcDNA3.1-Lin28 或si-Lin28 转染HepG2 细胞，采用qPCR及WB法检测转染后HepG2 细胞Lin28 的表达水平，CCK-8 法检测5-Fu 作用后转染细胞增殖活性变化并计算5-Fu 对细胞作用的IC50，流式细胞术检测5-Fu 处理后细胞凋亡情况、WB法检测凋亡相关蛋白的表达变化，qPCR法检测转染后耐药相关miRNA（let-7a 和let-7b）及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog和Sox2）的mRNA表达水平。结果：与空载对照组（HepG2/Vector）相比，HepG2/Lin28 组细胞中Lin28 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（P<0.05 或P<0.01），过表达Lin28 可显著抑制HepG2 细胞对5-Fu 作用的敏感性（IC50明显升高，P<0.05）和增强细胞增殖活性、使细胞凋亡率和凋亡相关蛋白caspase-3 表达明显降低（均P<0.01）。与阴性对照组（si-control）相比，si-Lin28 细胞中Lin28 表达水平显著下降（P<0.01）；敲减Lin28 可使细胞增殖活性及5-Fu 的IC50显著降低（均P<0.01），凋亡率及凋亡蛋白表达明显增加（P<0.01）。与HepG2/Vector 组比较，HepG2/Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog 和Sox2）的表达水平明显上调（均P<0.01），而si-Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及Oct4、Nanog、Sox2 的表达水平较si-control 组明显下调（均P<0.01）。结论：Lin28 可通过调节miRNAs的表达及肿瘤干细胞的形成从而调节肝癌HepG2细胞对化疗的敏感性，靶向调节Lin28 表达有望成为提高肝癌化疗疗效的手段。
目的：探讨RNA结合蛋白Lin28 对肝癌HepG2细胞5-氟尿嘧啶（5-Fu）敏感性的影响及其机制。方法：应用pcDNA3.1-Lin28 或si-Lin28 转染HepG2 细胞，采用qPCR及WB法检测转染后HepG2 细胞Lin28 的表达水平，CCK-8 法检测5-Fu 作用后转染细胞增殖活性变化并计算5-Fu 对细胞作用的IC50，流式细胞术检测5-Fu 处理后细胞凋亡情况、WB法检测凋亡相关蛋白的表达变化，qPCR法检测转染后耐药相关miRNA（let-7a 和let-7b）及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog和Sox2）的mRNA表达水平。结果：与空载对照组（HepG2/Vector）相比，HepG2/Lin28 组细胞中Lin28 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（P<0.05 或P<0.01），过表达Lin28 可显著抑制HepG2 细胞对5-Fu 作用的敏感性（IC50明显升高，P<0.05）和增强细胞增殖活性、使细胞凋亡率和凋亡相关蛋白caspase-3 表达明显降低（均P<0.01）。与阴性对照组（si-control）相比，si-Lin28 细胞中Lin28 表达水平显著下降（P<0.01）；敲减Lin28 可使细胞增殖活性及5-Fu 的IC50显著降低（均P<0.01），凋亡率及凋亡蛋白表达明显增加（P<0.01）。与HepG2/Vector 组比较，HepG2/Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及肿瘤干细胞标记物（Oct4、Nanog 和Sox2）的表达水平明显上调（均P<0.01），而si-Lin28 细胞中let-7a、let-7b 及Oct4、Nanog、Sox2 的表达水平较si-control 组明显下调（均P<0.01）。结论：Lin28 可通过调节miRNAs的表达及肿瘤干细胞的形成从而调节肝癌HepG2细胞对化疗的敏感性，靶向调节Lin28 表达有望成为提高肝癌化疗疗效的手段。
2020, 27(3):267-272.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.009
摘要:
目的：探讨circ_0005075 对肝癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法：收集唐山市工人医院2015 年3 月至2018 年3 月收治的35 例肝癌患者手术切除的肝癌及其相应癌旁组织，采用qPCR 检测肝癌、癌旁组织及细胞系（HCCC9810、HepG2、HLE 肝癌细胞和THLE-3 肝上皮细胞）中circ_0005075 和miR-335 的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0005075、miR-335 及CCND1 三者间的靶向关系。采用脂质体介导方法将sh-circ_0005075、miR-335 mimics、miR-335 mimics+pcDNA-CCND1、sh-circ_0005075+pcDNA-CCND1、pcDNA-circ_0005075+miR-335 mimics、sh-CCND1+pcDNA-circ_0005075 转染肝癌细胞HCCC9810，应用MTT和Transwell 法检测circ_0005075/miR-335/CCND1 分子轴正向和回复作用对HCCC9810 细胞增殖和侵袭的影响。结果：circ_0005075 在肝癌组织及细胞系中高表达（均P<0.01），且在HCCC9810 细胞中表达水平最高（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，circ_0005075 靶向负调控miR-335 的表达水平（P<0.05），且CCND1 是miR-335 的靶基因（P<0.05）。正向和回复实验证明，敲降circ_0005075 或过表达miR-335 都通过调控CCND1 抑制HCCC9810 细胞增殖和侵袭（P<0.05 或P<0.01）。结论：circ_0005075 通过海绵吸附miR-335 上调CCND1 的表达水平，进而促进HCCC9810 细胞的增殖和侵袭。
目的：探讨circ_0005075 对肝癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制。方法：收集唐山市工人医院2015 年3 月至2018 年3 月收治的35 例肝癌患者手术切除的肝癌及其相应癌旁组织，采用qPCR 检测肝癌、癌旁组织及细胞系（HCCC9810、HepG2、HLE 肝癌细胞和THLE-3 肝上皮细胞）中circ_0005075 和miR-335 的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证circ_0005075、miR-335 及CCND1 三者间的靶向关系。采用脂质体介导方法将sh-circ_0005075、miR-335 mimics、miR-335 mimics+pcDNA-CCND1、sh-circ_0005075+pcDNA-CCND1、pcDNA-circ_0005075+miR-335 mimics、sh-CCND1+pcDNA-circ_0005075 转染肝癌细胞HCCC9810，应用MTT和Transwell 法检测circ_0005075/miR-335/CCND1 分子轴正向和回复作用对HCCC9810 细胞增殖和侵袭的影响。结果：circ_0005075 在肝癌组织及细胞系中高表达（均P<0.01），且在HCCC9810 细胞中表达水平最高（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，circ_0005075 靶向负调控miR-335 的表达水平（P<0.05），且CCND1 是miR-335 的靶基因（P<0.05）。正向和回复实验证明，敲降circ_0005075 或过表达miR-335 都通过调控CCND1 抑制HCCC9810 细胞增殖和侵袭（P<0.05 或P<0.01）。结论：circ_0005075 通过海绵吸附miR-335 上调CCND1 的表达水平，进而促进HCCC9810 细胞的增殖和侵袭。
2020, 27(3):273-281.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.010
摘要:
目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA ，lncRNA）肺癌相关转录物1（lung cancer associated transcript 1，LUCAT1）对肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccRCC)786-O 细胞的增殖和迁移能力的影响及其作用机制。方法：选取2013 年6 月至2017 年6 月宜昌市第一人民医院泌尿外科行手术切除的40 例ccRCC患者癌组织及相应的癌旁组织样本，组织均经病理检查诊断明确。ccRCC细胞株786-O、ACHN、UM-RC-2 及正常肾上皮细胞系KiMA培养完成后，用qPCR法检测ccRCC组织和细胞株中miR-199-a-5p、HIF-1α 和LUCAT1T mRNA的表达，用CCK-8 实验检测786-O 细胞的增殖能力，Transwell 法检测786-O 细胞的迁移能力，双荧光素酶报告基因实验验证LUCAT1 与miR-199a-5p 的靶向作用关系，Western blotting 实验检测LUCAT1、miR-199a-5p 对HIF-1α 蛋白表达的影响。结果：LUCAT1 在ccRCC组织和细胞系786-O、ACHN和UM-RC-2 中呈高表达（均P<0.01），敲低LUCAT1 后可明显抑制786-O 细胞的增殖和迁移（均P<0.01）。miR-199a-5p 在ccRCC 组织和细胞系中呈低表达（均P<0.01），StarBase 数据库分析结果显示LUCAT1含有miR-199a-5p的保守目标位点，miR-199a-5p对LUCAT1-Wt的报告活性具有明显的抑制作用（P<0.01）；敲低LUCAT1可明显降低miR-199a-5p的表达（P<0.01）。LUCAT1 在转染miR-199a-5p 模拟物的786-O细胞中呈低表达，但在LUCAT1+miR-199a-5p 模拟物共转染的786-O细胞中出现逆转（P<0.05 或P<0.01）。转染miR-199a-5p 模拟物的786-O 细胞中HIF-1α mRNA 和蛋白表达水平升高，而LUCAT1 过表达可逆转该效应（P<0.05 或P<0.01）。转染miR-199a-5p模拟物抑制786-O 细胞的增殖和迁移，而转染LUCAT1 可部分消除转染miR-199a-5p 模拟物对786-O 细胞增殖和迁移的影响(P<0.05或P<0.01)。结论：lncRNA LUCAT1通过靶向调节miR-199a-5p/HIF-1α 的表达从而在ccRCC中发挥促癌效应。
目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA ，lncRNA）肺癌相关转录物1（lung cancer associated transcript 1，LUCAT1）对肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccRCC)786-O 细胞的增殖和迁移能力的影响及其作用机制。方法：选取2013 年6 月至2017 年6 月宜昌市第一人民医院泌尿外科行手术切除的40 例ccRCC患者癌组织及相应的癌旁组织样本，组织均经病理检查诊断明确。ccRCC细胞株786-O、ACHN、UM-RC-2 及正常肾上皮细胞系KiMA培养完成后，用qPCR法检测ccRCC组织和细胞株中miR-199-a-5p、HIF-1α 和LUCAT1T mRNA的表达，用CCK-8 实验检测786-O 细胞的增殖能力，Transwell 法检测786-O 细胞的迁移能力，双荧光素酶报告基因实验验证LUCAT1 与miR-199a-5p 的靶向作用关系，Western blotting 实验检测LUCAT1、miR-199a-5p 对HIF-1α 蛋白表达的影响。结果：LUCAT1 在ccRCC组织和细胞系786-O、ACHN和UM-RC-2 中呈高表达（均P<0.01），敲低LUCAT1 后可明显抑制786-O 细胞的增殖和迁移（均P<0.01）。miR-199a-5p 在ccRCC 组织和细胞系中呈低表达（均P<0.01），StarBase 数据库分析结果显示LUCAT1含有miR-199a-5p的保守目标位点，miR-199a-5p对LUCAT1-Wt的报告活性具有明显的抑制作用（P<0.01）；敲低LUCAT1可明显降低miR-199a-5p的表达（P<0.01）。LUCAT1 在转染miR-199a-5p 模拟物的786-O细胞中呈低表达，但在LUCAT1+miR-199a-5p 模拟物共转染的786-O细胞中出现逆转（P<0.05 或P<0.01）。转染miR-199a-5p 模拟物的786-O 细胞中HIF-1α mRNA 和蛋白表达水平升高，而LUCAT1 过表达可逆转该效应（P<0.05 或P<0.01）。转染miR-199a-5p模拟物抑制786-O 细胞的增殖和迁移，而转染LUCAT1 可部分消除转染miR-199a-5p 模拟物对786-O 细胞增殖和迁移的影响(P<0.05或P<0.01)。结论：lncRNA LUCAT1通过靶向调节miR-199a-5p/HIF-1α 的表达从而在ccRCC中发挥促癌效应。
2020, 27(3):282-288.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.011
摘要:
目的：探究长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）核仁小分子RNA 宿主基因6（small nuclear RNA host gene 6, SNHG6）促进食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma ，ESCC）细胞侵袭和转移的作用及其分子生物学机制。方法：使用实时定量聚合酶链式反应（real time quantitative polymerase chain reaction ，qPCR）检测36 例ESCC组织及其癌旁组织（标本收集自河北医科大学第四医院2019 年2 月至8 月外科手术的ESCC 患者）中SNHG6 表达水平；使用反转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction ，RT-PCR）检测ESCC 细胞系（TE1、Yes-2、Eca9706 和Kyse150）中SNHG6 表达水平，选用SNHG6 高表达的TE1 细胞，通过转染SNHG6-siRNA 敲低该细胞中SNHG6 表达；通过集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell 侵袭实验分别检测SNHG6 敲低前后TE1 细胞克隆形成、迁移和侵袭能力的变化；采用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测SNHG6 敲低前后TE1 细胞中锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1（zinc finger E-box binding homeobox factor 1, ZEB1）、MMP-2 和MMP-9 蛋白表达的变化。结果：SNHG6 在ESCC 组织和细胞系中均呈高表达状态（均P<0.01），且在TE1 细胞中高表达最为显著。转染SNHG6-siRNA 后TE1 细胞中SNHG6 表达水平显著降低（P<0.01），si-SNHG6-1 和si-SNHG6-2 组TE1 细胞的克隆形成、迁移和侵袭能力均显著低于对照组（均P<0.01），两组细胞中MMP-2、MMP-9 和ZEB1 表达水平均显著低于对照组（均P<0.05）。结论：ESCC 组织中呈高表达的SNHG6可促进TE1 细胞的恶性生物学行为，其机制可能涉及ZEB1 表达的上调。
目的：探究长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）核仁小分子RNA 宿主基因6（small nuclear RNA host gene 6, SNHG6）促进食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma ，ESCC）细胞侵袭和转移的作用及其分子生物学机制。方法：使用实时定量聚合酶链式反应（real time quantitative polymerase chain reaction ，qPCR）检测36 例ESCC组织及其癌旁组织（标本收集自河北医科大学第四医院2019 年2 月至8 月外科手术的ESCC 患者）中SNHG6 表达水平；使用反转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction ，RT-PCR）检测ESCC 细胞系（TE1、Yes-2、Eca9706 和Kyse150）中SNHG6 表达水平，选用SNHG6 高表达的TE1 细胞，通过转染SNHG6-siRNA 敲低该细胞中SNHG6 表达；通过集落形成实验、划痕愈合实验和Transwell 侵袭实验分别检测SNHG6 敲低前后TE1 细胞克隆形成、迁移和侵袭能力的变化；采用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测SNHG6 敲低前后TE1 细胞中锌指蛋白E-盒结合同源异形盒-1（zinc finger E-box binding homeobox factor 1, ZEB1）、MMP-2 和MMP-9 蛋白表达的变化。结果：SNHG6 在ESCC 组织和细胞系中均呈高表达状态（均P<0.01），且在TE1 细胞中高表达最为显著。转染SNHG6-siRNA 后TE1 细胞中SNHG6 表达水平显著降低（P<0.01），si-SNHG6-1 和si-SNHG6-2 组TE1 细胞的克隆形成、迁移和侵袭能力均显著低于对照组（均P<0.01），两组细胞中MMP-2、MMP-9 和ZEB1 表达水平均显著低于对照组（均P<0.05）。结论：ESCC 组织中呈高表达的SNHG6可促进TE1 细胞的恶性生物学行为，其机制可能涉及ZEB1 表达的上调。
2020, 27(3):289-294.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.012
摘要:
目的：研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶招募域家族分子10（caspase recruitment domain family member 10，CARD10）在肝癌组织中的表达，及其对肝癌进展尤其是凋亡抵抗的作用和机制。方法：采集2008 年至2010 年海军军医大学东方肝胆外科医院收治的129 例肝癌患者手术切除的肝癌及其癌旁组织标本，采用实时定量PCR法检测癌旁和肝癌组织中CARD10 的表达，以Spearman 等级相关统计学分析CARD10 表达与肝癌分期的相关性。在CARD10 质粒转染过表达以及RNA干扰敲减表达后，采用流式细胞术Annexin-V/PI 标记法检测肝癌细胞株的凋亡，采用Western blotting 检测肝癌细胞株中NF-κB信号的活化。结果：CARD10 在肝癌组织中的表达较癌旁组织显著增高（P<0.01），且肝癌组织中CARD10 的表达增高与肝癌分期进展呈正相关（P<0.01）。CARD10 过表达可以抑制肝癌细胞株SMMC-7721 和BEL-7402 的凋亡，而敲减CARD10 能够促进肝癌细胞株凋亡。CARD10 过表达能够增强肝癌细胞株中促生存的NF-κB信号的活化，而CARD10 敲减能够抑制NF-κB信号活化。结论：CARD10在肝癌组织中表达显著增高并与肝癌进展呈正相关，CARD10 能够通过活化NF-κB信号进而促进肝癌细胞凋亡抵抗。
目的：研究半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶招募域家族分子10（caspase recruitment domain family member 10，CARD10）在肝癌组织中的表达，及其对肝癌进展尤其是凋亡抵抗的作用和机制。方法：采集2008 年至2010 年海军军医大学东方肝胆外科医院收治的129 例肝癌患者手术切除的肝癌及其癌旁组织标本，采用实时定量PCR法检测癌旁和肝癌组织中CARD10 的表达，以Spearman 等级相关统计学分析CARD10 表达与肝癌分期的相关性。在CARD10 质粒转染过表达以及RNA干扰敲减表达后，采用流式细胞术Annexin-V/PI 标记法检测肝癌细胞株的凋亡，采用Western blotting 检测肝癌细胞株中NF-κB信号的活化。结果：CARD10 在肝癌组织中的表达较癌旁组织显著增高（P<0.01），且肝癌组织中CARD10 的表达增高与肝癌分期进展呈正相关（P<0.01）。CARD10 过表达可以抑制肝癌细胞株SMMC-7721 和BEL-7402 的凋亡，而敲减CARD10 能够促进肝癌细胞株凋亡。CARD10 过表达能够增强肝癌细胞株中促生存的NF-κB信号的活化，而CARD10 敲减能够抑制NF-κB信号活化。结论：CARD10在肝癌组织中表达显著增高并与肝癌进展呈正相关，CARD10 能够通过活化NF-κB信号进而促进肝癌细胞凋亡抵抗。
2020, 27(3):295-301.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.013
摘要:
目的：探讨基于非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者原发灶组织中程序性死亡受体-配体1（programmed death-ligand 1，PD-L1）表达和间质中CD8+T细胞浸润的免疫微环境分型的特点及其临床意义。方法:回顾性分析2016年1 月到2018 年7 月空军特色医学中心收治的74 例NSCLC患者的石蜡组织标本及临床病理资料，所有患者均有EGFR基因检测结果、未接受放化疗及靶向治疗。采用免疫组化方法检测组织中PD-L1 表达及间质中CD8+T细胞浸润，分别分析PD-L1、CD8+T细胞及基于两者的免疫微环境分型与病理参数和患者生存的关系。结果:NSCLC患者原发灶组织中PD-L1 表达在不同性别、病理类型、吸烟史、EFGR突变组中有明显差异（均P<0.05），CD8+T细胞浸润在不同TNM分期、淋巴结转移组织各组中有明显差异（均P<0.05）；PD-L1 表达与EGFR突变显著相关（P=0.000），而CD8+T细胞浸润与EGFR突变不相关（P=0.605）。EGFR野生型患者免疫微环境以CD8+ PD-L1（+ Ⅰ型）为主、突变型以CD8- PD-L1（- Ⅱ型）及CD8+ PD-L1（- Ⅳ型）为主。免疫微环境分型在不同EGFR突变、吸烟史、病理分化程度的各组中分布有明显差异（均P<0.05），且与EGFR突变显著相关（P<0.05）。随访显示处于无病生存期、复发转移和死亡患者中分别以Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅰ型最多。结论:本组NSCLC患者肿瘤免疫微环境分型分布主要以Ⅰ型最多、Ⅲ型最少，其分型与EGFR突变、吸烟史及病理分化有关；EGFR突变患者以CD8+ PD-L1（- Ⅱ）型和CD8+ PD-L1（- Ⅳ型）为主，且与PD-L1低表达相关。
目的：探讨基于非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者原发灶组织中程序性死亡受体-配体1（programmed death-ligand 1，PD-L1）表达和间质中CD8+T细胞浸润的免疫微环境分型的特点及其临床意义。方法:回顾性分析2016年1 月到2018 年7 月空军特色医学中心收治的74 例NSCLC患者的石蜡组织标本及临床病理资料，所有患者均有EGFR基因检测结果、未接受放化疗及靶向治疗。采用免疫组化方法检测组织中PD-L1 表达及间质中CD8+T细胞浸润，分别分析PD-L1、CD8+T细胞及基于两者的免疫微环境分型与病理参数和患者生存的关系。结果:NSCLC患者原发灶组织中PD-L1 表达在不同性别、病理类型、吸烟史、EFGR突变组中有明显差异（均P<0.05），CD8+T细胞浸润在不同TNM分期、淋巴结转移组织各组中有明显差异（均P<0.05）；PD-L1 表达与EGFR突变显著相关（P=0.000），而CD8+T细胞浸润与EGFR突变不相关（P=0.605）。EGFR野生型患者免疫微环境以CD8+ PD-L1（+ Ⅰ型）为主、突变型以CD8- PD-L1（- Ⅱ型）及CD8+ PD-L1（- Ⅳ型）为主。免疫微环境分型在不同EGFR突变、吸烟史、病理分化程度的各组中分布有明显差异（均P<0.05），且与EGFR突变显著相关（P<0.05）。随访显示处于无病生存期、复发转移和死亡患者中分别以Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅰ型最多。结论:本组NSCLC患者肿瘤免疫微环境分型分布主要以Ⅰ型最多、Ⅲ型最少，其分型与EGFR突变、吸烟史及病理分化有关；EGFR突变患者以CD8+ PD-L1（- Ⅱ）型和CD8+ PD-L1（- Ⅳ型）为主，且与PD-L1低表达相关。
2020, 27(3):302-308.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.014
摘要:
目的：利用生物信息学方法分析前梯度蛋白2（anterior gradient protein-2，AGR2）在乳腺癌中的表达情况，并分析预测其所涉及的生物学功能及分子信号通路。方法：挖掘Oncomine 和GEPIA数据库中AGR2 在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达情况，分析CCLE数据库中AGR2 在乳腺癌细胞系中的表达水平，同时利用HPA数据库分析AGR2 蛋白在正常和乳腺癌组织中的表达水平，并分析其表达与预后关系。Progno Scan 分析AGR2 表达与预后的关系从CCLE下载乳腺癌相关基因芯片并用R语言筛选AGR2 共表达基因，利用GO功能富集分析和KEGG信号通路分析对AGR2 相关共表达基因进行功能注释。结果：Oncomine和GEPIA数据分析显示AGR2 基因在乳腺癌组织中高表达，CCLE数据分析表明AGR2 在乳腺癌细胞系中显著高表达，HPA数据库免疫组化结果显示乳腺癌组织AGR2 蛋白相对于正常乳腺组织高表达；Progno Scan 分析显示AGR2 高表达提示乳腺癌预后不良。利用R软件共筛选出946 个在乳腺癌中同AGR2 共表达的基因，GO功能富集分析显示，共表达基因主要涉及蛋白定位到细胞周围、蛋白定位到细胞膜、细胞连接组装、细胞基质黏附、细胞连接组成等生物学功能；KEGG分析显示共表达基因主要参与乳腺癌和胃癌进程，并和蛋白聚糖在癌症中的作用及缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸降解通路相关。结论：AGR2 在乳腺癌组织和细胞中均高表达，其可能是乳腺癌中潜在的促癌基因，有望成为乳腺癌治疗的新靶标。
目的：利用生物信息学方法分析前梯度蛋白2（anterior gradient protein-2，AGR2）在乳腺癌中的表达情况，并分析预测其所涉及的生物学功能及分子信号通路。方法：挖掘Oncomine 和GEPIA数据库中AGR2 在乳腺癌和正常乳腺组织中的表达情况，分析CCLE数据库中AGR2 在乳腺癌细胞系中的表达水平，同时利用HPA数据库分析AGR2 蛋白在正常和乳腺癌组织中的表达水平，并分析其表达与预后关系。Progno Scan 分析AGR2 表达与预后的关系从CCLE下载乳腺癌相关基因芯片并用R语言筛选AGR2 共表达基因，利用GO功能富集分析和KEGG信号通路分析对AGR2 相关共表达基因进行功能注释。结果：Oncomine和GEPIA数据分析显示AGR2 基因在乳腺癌组织中高表达，CCLE数据分析表明AGR2 在乳腺癌细胞系中显著高表达，HPA数据库免疫组化结果显示乳腺癌组织AGR2 蛋白相对于正常乳腺组织高表达；Progno Scan 分析显示AGR2 高表达提示乳腺癌预后不良。利用R软件共筛选出946 个在乳腺癌中同AGR2 共表达的基因，GO功能富集分析显示，共表达基因主要涉及蛋白定位到细胞周围、蛋白定位到细胞膜、细胞连接组装、细胞基质黏附、细胞连接组成等生物学功能；KEGG分析显示共表达基因主要参与乳腺癌和胃癌进程，并和蛋白聚糖在癌症中的作用及缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸降解通路相关。结论：AGR2 在乳腺癌组织和细胞中均高表达，其可能是乳腺癌中潜在的促癌基因，有望成为乳腺癌治疗的新靶标。
2020, 27(3):309-314.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.015
摘要:
目的：系统评价PD-1/PD-L1 抑制剂联合化疗对比化疗一线治疗晚期非小细胞肺癌（non-small lung cancer，NSCLC）的疗效及安全性。方法：检索PubMed、Cochrane Library、EMbase、EBSCO循证医学数据库、中国生物医学文献数据库（Chinese Biomedical Literature Database，CBM）、中国知网（Chinese Journal Full-text Database，CNKI）、中文科技期刊全文数据库（VIP）中收录的PD-1/PD-L1 抑制剂联合化疗对比化疗一线治疗晚期NSCLC 的随机对照试验（randomized controlled trials，RCTs），采用RevMan 5.2 软件进行Meta 分析。结果：纳入6 个临床RCTs 共3 238 例晚期NSCLC。Meta 分析结果显示，PD-1/PD-L1 抑制剂联合化疗与化疗相比可显著延长OS（HR=0.86，95%CI=0.79~0.94，P=0.0006）和PFS（HR=0.81，95%CI=0.78~0.84，P<0.00001）；1~5 级血小板计数减少、呕吐、腹泻、甲状腺功能减低或亢进、皮疹、肺炎、结肠炎、肝炎、味觉障碍，3~5 级肝炎的不良反应发生率较化疗组高，差异具有统计学意义（P<0.01 或P<0.05）。结论：PD-1/PD-L1 抑制剂联合化疗较单独化疗一线治疗晚期NSCLC可显著延长患者OS和PFS，但不良反应发生率较化疗高。
目的：系统评价PD-1/PD-L1 抑制剂联合化疗对比化疗一线治疗晚期非小细胞肺癌（non-small lung cancer，NSCLC）的疗效及安全性。方法：检索PubMed、Cochrane Library、EMbase、EBSCO循证医学数据库、中国生物医学文献数据库（Chinese Biomedical Literature Database，CBM）、中国知网（Chinese Journal Full-text Database，CNKI）、中文科技期刊全文数据库（VIP）中收录的PD-1/PD-L1 抑制剂联合化疗对比化疗一线治疗晚期NSCLC 的随机对照试验（randomized controlled trials，RCTs），采用RevMan 5.2 软件进行Meta 分析。结果：纳入6 个临床RCTs 共3 238 例晚期NSCLC。Meta 分析结果显示，PD-1/PD-L1 抑制剂联合化疗与化疗相比可显著延长OS（HR=0.86，95%CI=0.79~0.94，P=0.0006）和PFS（HR=0.81，95%CI=0.78~0.84，P<0.00001）；1~5 级血小板计数减少、呕吐、腹泻、甲状腺功能减低或亢进、皮疹、肺炎、结肠炎、肝炎、味觉障碍，3~5 级肝炎的不良反应发生率较化疗组高，差异具有统计学意义（P<0.01 或P<0.05）。结论：PD-1/PD-L1 抑制剂联合化疗较单独化疗一线治疗晚期NSCLC可显著延长患者OS和PFS，但不良反应发生率较化疗高。
2020, 27(3):315-320.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.016
摘要:
长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度大于200 nt、且不编码的RNA。lncRNA 已被证明与人类疾病紧密相关，尤其是肿瘤发生发展。研究表明，肿瘤中一些异常表达的lncRNA 可以通过不同的信号通路，如Wnt/β-catenin 信号通路，促进肿瘤进展过程。在不同肿瘤组织中具有特异性表达特征的lncRNA与Wnt/β-catenin 信号通路之间的相互作用显示出其作为新的生物标志物和治疗靶点的潜能。本文就Wnt/β-catenin 信号通路相关lncRNA 通过调控Wnt/β-catenin 信号转导，影响不同肿瘤类型发生发展的作用进行综述。本文结果或可为临床肿瘤诊断和治疗提供新的思路。
长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度大于200 nt、且不编码的RNA。lncRNA 已被证明与人类疾病紧密相关，尤其是肿瘤发生发展。研究表明，肿瘤中一些异常表达的lncRNA 可以通过不同的信号通路，如Wnt/β-catenin 信号通路，促进肿瘤进展过程。在不同肿瘤组织中具有特异性表达特征的lncRNA与Wnt/β-catenin 信号通路之间的相互作用显示出其作为新的生物标志物和治疗靶点的潜能。本文就Wnt/β-catenin 信号通路相关lncRNA 通过调控Wnt/β-catenin 信号转导，影响不同肿瘤类型发生发展的作用进行综述。本文结果或可为临床肿瘤诊断和治疗提供新的思路。
2020, 27(3):321-326.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.017
摘要:
染色体外DNA（extrachromosomal DNA，ecDNA）是存在于肿瘤细胞中、可在有丝分裂中期被光镜观察到的游离于染色体外的环形DNA。ecDNA不仅携带高拷贝的癌基因，而且转录活跃，是癌基因表达的主要来源；另外其还是形成肿瘤异质性的关键。本文将就上述ecDNA对肿瘤的作用机制进行概述，并提出关于该领域的研究展望。
染色体外DNA（extrachromosomal DNA，ecDNA）是存在于肿瘤细胞中、可在有丝分裂中期被光镜观察到的游离于染色体外的环形DNA。ecDNA不仅携带高拷贝的癌基因，而且转录活跃，是癌基因表达的主要来源；另外其还是形成肿瘤异质性的关键。本文将就上述ecDNA对肿瘤的作用机制进行概述，并提出关于该领域的研究展望。
2020, 27(3):327-332.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.018
摘要:
卵巢上皮癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是妇科肿瘤中最致命的恶性肿瘤，在进行最大限度的肿瘤细胞减灭术后需结合铂类药物及紫杉醇联合化疗。多数临床化疗结果表明，EOC患者肿瘤复发后常引起化疗药物的耐药，导致预后差、病死率高。锌指E盒结合同源框1（zinc finger E-box-binding homeobox 1，ZEB1）是多种肿瘤发生、发展、迁移、转移和侵袭的重要调控因子。ZEB1 可能通过调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）过程、非编码RNA（如miRNA、lncRNA）调控影响卵巢癌耐药；此外，ZEB1 还可介导p73 和BRCA1 相关的表观遗传调控参与卵巢癌的耐药。本文从ZEB1 的结构与生理功能、在卵巢癌发生发展和在卵巢癌耐药中的作用及其可能涉及的机制，以及其作为卵巢癌生物标志物的潜力等方面做一综述，为临床治疗EOC寻找新的治疗策略。
卵巢上皮癌（epithelial ovarian cancer，EOC）是妇科肿瘤中最致命的恶性肿瘤，在进行最大限度的肿瘤细胞减灭术后需结合铂类药物及紫杉醇联合化疗。多数临床化疗结果表明，EOC患者肿瘤复发后常引起化疗药物的耐药，导致预后差、病死率高。锌指E盒结合同源框1（zinc finger E-box-binding homeobox 1，ZEB1）是多种肿瘤发生、发展、迁移、转移和侵袭的重要调控因子。ZEB1 可能通过调控上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）过程、非编码RNA（如miRNA、lncRNA）调控影响卵巢癌耐药；此外，ZEB1 还可介导p73 和BRCA1 相关的表观遗传调控参与卵巢癌的耐药。本文从ZEB1 的结构与生理功能、在卵巢癌发生发展和在卵巢癌耐药中的作用及其可能涉及的机制，以及其作为卵巢癌生物标志物的潜力等方面做一综述，为临床治疗EOC寻找新的治疗策略。
2020, 27(3):333-337.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2020.03.019
摘要:
腹膜转移癌是临床常见难题，其局部微环境近年来已逐步被关注和研究。腹膜和腹水构成了腹膜转移性癌灶特殊的局部微环境，巨噬细胞是腹膜转移癌微环境中占比最多的免疫细胞群体，具有多种亚型，分泌多种细胞因子，参与多条信号通路，在癌细胞存活、血管生成、腹膜侵袭和腹膜转移癌形成的过程中发挥了重要作用。近年来，细胞免疫治疗取得突破性进展，其中靶向肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞的免疫治疗逐步开展，多项临床试验正在进行中。本文对巨噬细胞在癌症腹膜转移过程中发挥的作用，以及针对巨噬细胞可能的治疗靶点进行综述。
腹膜转移癌是临床常见难题，其局部微环境近年来已逐步被关注和研究。腹膜和腹水构成了腹膜转移性癌灶特殊的局部微环境，巨噬细胞是腹膜转移癌微环境中占比最多的免疫细胞群体，具有多种亚型，分泌多种细胞因子，参与多条信号通路，在癌细胞存活、血管生成、腹膜侵袭和腹膜转移癌形成的过程中发挥了重要作用。近年来，细胞免疫治疗取得突破性进展，其中靶向肿瘤微环境中肿瘤相关巨噬细胞的免疫治疗逐步开展，多项临床试验正在进行中。本文对巨噬细胞在癌症腹膜转移过程中发挥的作用，以及针对巨噬细胞可能的治疗靶点进行综述。
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- 《中国肿瘤生物治疗杂志》
- 1994年创刊
- 主办单位：中国免疫学会、中国抗癌学会
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- 刊号：ISSN 1007-385X
- CN 31-1725/R
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