2024年第31卷第7期文章目次
2024, 31(7):647-654.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.001
摘要:
嵌合抗原受体基因修饰T（CAR-T）细胞免疫治疗被认为是最有前景的肿瘤治疗方法之一，效应CAR-T细胞的数量是 决定CAR-T细胞疗法治疗效果的关键因素。CAR-T细胞的体外扩增耗时耗力，回输体内后，CAR-T细胞大量耗竭且难以浸润实 体瘤，导致能有效抑制实体瘤的CAR-T细胞数量大幅下降。目前，CAR-T细胞的扩增方法在提高扩增特异性和治疗安全性等方 面均存在问题，为CAR-T细胞疗法的临床转化造成困难。近年来，新型免疫激动剂及其下游信号的发现为CAR-T细胞扩增方案 提供了更多选择，免疫激动剂给药方式的更新迭代进一步提高了其在体内扩增CAR-T细胞的安全性。本文分析了目前扩增CAR-T细 胞面临的挑战，系统阐述了近年来在体内外扩增CAR-T细胞的新策略，为CAR-T细胞疗法的疗效和产能优化提供了新思路。
嵌合抗原受体基因修饰T（CAR-T）细胞免疫治疗被认为是最有前景的肿瘤治疗方法之一，效应CAR-T细胞的数量是 决定CAR-T细胞疗法治疗效果的关键因素。CAR-T细胞的体外扩增耗时耗力，回输体内后，CAR-T细胞大量耗竭且难以浸润实 体瘤，导致能有效抑制实体瘤的CAR-T细胞数量大幅下降。目前，CAR-T细胞的扩增方法在提高扩增特异性和治疗安全性等方 面均存在问题，为CAR-T细胞疗法的临床转化造成困难。近年来，新型免疫激动剂及其下游信号的发现为CAR-T细胞扩增方案 提供了更多选择，免疫激动剂给药方式的更新迭代进一步提高了其在体内扩增CAR-T细胞的安全性。本文分析了目前扩增CAR-T细 胞面临的挑战，系统阐述了近年来在体内外扩增CAR-T细胞的新策略，为CAR-T细胞疗法的疗效和产能优化提供了新思路。
2024, 31(7):655-661.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.002
摘要:
目的：设计和构建表达PD-1 shRNA的靶向CD19 CAR-T细胞并验证其体外肿瘤细胞杀伤能力。方法：设计并构建 表达PD-1 shRNA的CD19 CAR分子基因，将其包装成逆转录病毒载体，通过qPCR法检测病毒载体拷贝数。将慢病毒转导人原 代T细胞，获得三种CAR-T细胞，分别为RNAU6-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA1-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA2-CD19 CAR-T细胞。 采用qPCR法检测三种CAR-T细胞中PD-1 mRNA的表达水平，流式细胞术检测三种CAR-T细胞中PD-1表达水平，萤光素酶报 告基因实验、流式细胞术检测在不同效靶比时 CAR-T 细胞对 CD19 阳性靶细胞（人淋巴瘤 daudi 细胞）的杀伤功能。结果： RNAU6-CD19 CAR、PD-1 shRNA1-CD19 CAR、PD-1 shRNA2-CD19 CAR 三种 CAR 分子成功包装成逆转录病毒载体，病毒载 体拷贝数均高于 1×107 拷贝/mL，转导人原代 T 细胞获得 CAR-T 细胞，RNAU6-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA1-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA2-CD19 CAR-T细胞转导效率分别为43.1%、55.1%、41.7%。与RNAU6-CD19 CAR-T细胞相比，PD-1 shRNA1-CD19 CAR-T、 PD-1 shRNA2-CD19 CAR-T细胞中PD-1 mRNA表达水平均显著降低（均P<0.01）、细胞表面PD-1表达水平更低（均P<0.01）、体 外对daudi细胞的杀伤率更高（P<0.05或P<0.01）。结论：成功构建表达PD-1 shRNA的靶向CD19 CAR-T细胞，其对CD19阳性 靶细胞的杀伤率显著提高，PD-1 mRNA及其翻译产物PD-1的表达减少，CAR-T细胞的耗竭减缓。
目的：设计和构建表达PD-1 shRNA的靶向CD19 CAR-T细胞并验证其体外肿瘤细胞杀伤能力。方法：设计并构建 表达PD-1 shRNA的CD19 CAR分子基因，将其包装成逆转录病毒载体，通过qPCR法检测病毒载体拷贝数。将慢病毒转导人原 代T细胞，获得三种CAR-T细胞，分别为RNAU6-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA1-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA2-CD19 CAR-T细胞。 采用qPCR法检测三种CAR-T细胞中PD-1 mRNA的表达水平，流式细胞术检测三种CAR-T细胞中PD-1表达水平，萤光素酶报 告基因实验、流式细胞术检测在不同效靶比时 CAR-T 细胞对 CD19 阳性靶细胞（人淋巴瘤 daudi 细胞）的杀伤功能。结果： RNAU6-CD19 CAR、PD-1 shRNA1-CD19 CAR、PD-1 shRNA2-CD19 CAR 三种 CAR 分子成功包装成逆转录病毒载体，病毒载 体拷贝数均高于 1×107 拷贝/mL，转导人原代 T 细胞获得 CAR-T 细胞，RNAU6-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA1-CD19 CAR-T、PD-1 shRNA2-CD19 CAR-T细胞转导效率分别为43.1%、55.1%、41.7%。与RNAU6-CD19 CAR-T细胞相比，PD-1 shRNA1-CD19 CAR-T、 PD-1 shRNA2-CD19 CAR-T细胞中PD-1 mRNA表达水平均显著降低（均P<0.01）、细胞表面PD-1表达水平更低（均P<0.01）、体 外对daudi细胞的杀伤率更高（P<0.05或P<0.01）。结论：成功构建表达PD-1 shRNA的靶向CD19 CAR-T细胞，其对CD19阳性 靶细胞的杀伤率显著提高，PD-1 mRNA及其翻译产物PD-1的表达减少，CAR-T细胞的耗竭减缓。
2024, 31(7):662-668.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.003
摘要:
目的：探讨恶性肿瘤中Dickkopf-1（DKK1）表达对CD4+ T细胞极化的影响及其作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。 方法：利用生物信息学方法分析DKK1在多种类型肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平，分析DKK1表达与肿瘤患者预后及肿瘤 微环境免疫浸润间的相关性。利用流式细胞术检测DKK1蛋白对CD4+ T细胞表型变化的影响。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠 皮下移植瘤模型，观察阻断DKK1对小鼠移植瘤生长和移植瘤组织中免疫细胞浸润与表型的影响。结果：DKK1 mRNA表达水 平在多种肿瘤组织中显著高于癌旁组织，DKK1高表达与多数肿瘤患者的不良预后相关且在多数肿瘤中DKK1对CD4+ T细胞抗 肿瘤免疫应答功能有重要负性调节作用（P<0.05或P<0.01）。流式细胞术检测结果显示 ，DKK1 蛋白刺激可显著降低CD4+ T细 胞中T-bet、IFN-γ 及 CD107a 表达水平（均P<0.01）。在小鼠皮下黑色素瘤模型中发现，阻断DKK1可以显著抑制小鼠移植瘤的生长 （P<0.01），有效改善抗肿瘤免疫应答，表现为 Th1 细胞（T-bet + CD4+ ）占比显著升高（P<0.001），效应性 CD8+ T 细胞（CD44+ CD62L- ）占比显著升高（P<0.01），Th2细胞（GATA3+ CD4+ ）与Treg细胞占比显著下降（均P<0.01）。结论：阻断DKK1可有效促进 CD4+ T细胞向Th1型极化，DKK1具有作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。
目的：探讨恶性肿瘤中Dickkopf-1（DKK1）表达对CD4+ T细胞极化的影响及其作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。 方法：利用生物信息学方法分析DKK1在多种类型肿瘤组织和癌旁组织中的表达水平，分析DKK1表达与肿瘤患者预后及肿瘤 微环境免疫浸润间的相关性。利用流式细胞术检测DKK1蛋白对CD4+ T细胞表型变化的影响。构建黑色素瘤B16F10细胞小鼠 皮下移植瘤模型，观察阻断DKK1对小鼠移植瘤生长和移植瘤组织中免疫细胞浸润与表型的影响。结果：DKK1 mRNA表达水 平在多种肿瘤组织中显著高于癌旁组织，DKK1高表达与多数肿瘤患者的不良预后相关且在多数肿瘤中DKK1对CD4+ T细胞抗 肿瘤免疫应答功能有重要负性调节作用（P<0.05或P<0.01）。流式细胞术检测结果显示 ，DKK1 蛋白刺激可显著降低CD4+ T细 胞中T-bet、IFN-γ 及 CD107a 表达水平（均P<0.01）。在小鼠皮下黑色素瘤模型中发现，阻断DKK1可以显著抑制小鼠移植瘤的生长 （P<0.01），有效改善抗肿瘤免疫应答，表现为 Th1 细胞（T-bet + CD4+ ）占比显著升高（P<0.001），效应性 CD8+ T 细胞（CD44+ CD62L- ）占比显著升高（P<0.01），Th2细胞（GATA3+ CD4+ ）与Treg细胞占比显著下降（均P<0.01）。结论：阻断DKK1可有效促进 CD4+ T细胞向Th1型极化，DKK1具有作为肿瘤免疫治疗靶点的潜在价值。
2024, 31(7):669-674.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.004
摘要:
目的：利用昆虫杆状病毒表达系统（昆虫BEVS）表达糖酵解酶α-烯醇化酶（ENO1）及其3种酶活性位点缺失突变的 ENO1 蛋白 ENO1-M1、ENO1-M2 和 ENO1-M3，为后续宫颈癌的代谢治疗研究奠定基础。方法：利用分子克隆技术将优化后 ENO1序列插入pFastBacTM1载体，获得含有目的基因的重组质粒 pFastBac-ENO1。分别缺失ENO1发挥糖酵解酶功能的3个活 性位点，进行优化后将其插入pFastBacTM1载体，获得3个活性位点缺失的重组质粒pFastBac-M1、pFastBac-M2和pFastBac-M3。 通过转座、转染后获得重组杆状病毒rBV-ENO1、rBV-M1、rBV-M2和rBV-M3，利用WB法对目的蛋白的表达及特异性进行检测。结 果：成功扩增重组杆粒rBacmid-ENO1、rBacmid-M1、rBacmid-M2和rBacmid-M3，获得大小约2 000 bp的基因片段，与预期大小相 符。昆虫BEVS可表达ENO1蛋白及其3个酶活位点缺失的重组蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，其分子量约为52 000，与 预期相符。WB法鉴定这些蛋白能与特异性标签His-tag发生反应。结论：通过昆虫BEVS成功表达目的蛋白ENO1及其酶活性 位点缺失蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，这些蛋白具有反应原性，为后续测定这些蛋白与ENO1单抗亲和力创造了条件。
目的：利用昆虫杆状病毒表达系统（昆虫BEVS）表达糖酵解酶α-烯醇化酶（ENO1）及其3种酶活性位点缺失突变的 ENO1 蛋白 ENO1-M1、ENO1-M2 和 ENO1-M3，为后续宫颈癌的代谢治疗研究奠定基础。方法：利用分子克隆技术将优化后 ENO1序列插入pFastBacTM1载体，获得含有目的基因的重组质粒 pFastBac-ENO1。分别缺失ENO1发挥糖酵解酶功能的3个活 性位点，进行优化后将其插入pFastBacTM1载体，获得3个活性位点缺失的重组质粒pFastBac-M1、pFastBac-M2和pFastBac-M3。 通过转座、转染后获得重组杆状病毒rBV-ENO1、rBV-M1、rBV-M2和rBV-M3，利用WB法对目的蛋白的表达及特异性进行检测。结 果：成功扩增重组杆粒rBacmid-ENO1、rBacmid-M1、rBacmid-M2和rBacmid-M3，获得大小约2 000 bp的基因片段，与预期大小相 符。昆虫BEVS可表达ENO1蛋白及其3个酶活位点缺失的重组蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，其分子量约为52 000，与 预期相符。WB法鉴定这些蛋白能与特异性标签His-tag发生反应。结论：通过昆虫BEVS成功表达目的蛋白ENO1及其酶活性 位点缺失蛋白ENO1-M1、ENO1-M2和ENO1-M3，这些蛋白具有反应原性，为后续测定这些蛋白与ENO1单抗亲和力创造了条件。
2024, 31(7):675-680.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.005
摘要:
目的：探讨高良姜素（Gal）是否通过调节cGAS/STING信号通路影响骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。方 法：体外培养人骨肉瘤MG63细胞，分别使用0、5、15、25、50、100、200 μmol/L的Gal培养48 h后，CCK-8法检测Gal对细胞活力的 影响。将MG63细胞分为对照组（未处理细胞）、Gal低浓度组（Gal-L组，50 μmol/L Gal处理）、Gal高浓度组（Gal-H组，100 μmol/L Gal处理）和Gal-H+STING抑制剂组（Gal-H+H-151组，100 μmol/L Gal+8 μmol/L H-151处理）。采用EdU染色法、划痕愈合实验、 Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞增殖活力、迁移、侵袭和凋亡能力，WB法检测各组细胞中cGAS、STING蛋白的表达 水平。结果：与对照组比较，Gal-L 组、Gal-H 组细胞增殖活力、迁移、侵袭能力均显著降低（均 P<0.05），细胞凋亡率和 cGAS、 STING蛋白表达水平均显著升高（均P<0.05）；与 Gal-H 组比较，Gal-H+H-151组细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著升高（均 P<0.05），细胞凋亡率和cGAS、STING蛋白表达水平均显著降低（均P<0.05）。结论：Gal可能通过激活cGAS/STING信号通路抑 制骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。
目的：探讨高良姜素（Gal）是否通过调节cGAS/STING信号通路影响骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡。方 法：体外培养人骨肉瘤MG63细胞，分别使用0、5、15、25、50、100、200 μmol/L的Gal培养48 h后，CCK-8法检测Gal对细胞活力的 影响。将MG63细胞分为对照组（未处理细胞）、Gal低浓度组（Gal-L组，50 μmol/L Gal处理）、Gal高浓度组（Gal-H组，100 μmol/L Gal处理）和Gal-H+STING抑制剂组（Gal-H+H-151组，100 μmol/L Gal+8 μmol/L H-151处理）。采用EdU染色法、划痕愈合实验、 Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞增殖活力、迁移、侵袭和凋亡能力，WB法检测各组细胞中cGAS、STING蛋白的表达 水平。结果：与对照组比较，Gal-L 组、Gal-H 组细胞增殖活力、迁移、侵袭能力均显著降低（均 P<0.05），细胞凋亡率和 cGAS、 STING蛋白表达水平均显著升高（均P<0.05）；与 Gal-H 组比较，Gal-H+H-151组细胞增殖活力、迁移和侵袭能力均显著升高（均 P<0.05），细胞凋亡率和cGAS、STING蛋白表达水平均显著降低（均P<0.05）。结论：Gal可能通过激活cGAS/STING信号通路抑 制骨肉瘤MG63细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。
2024, 31(7):681-686.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.006
摘要:
目的：探讨解偶联蛋白2（UCP2）抑制剂京尼平（GEN）对人下咽癌FaDu细胞增殖及线粒体功能的影响。方法：使用 不同浓度的GEN作用于 FaDu 细胞 24 h，实验分为GEN 0（对照）、50、100、200和400 μmol/L组。采用CCK-8法检测各组细胞 增殖能力，DCFH-DA探针及JC-1染色联合流式细胞术检测GEN对FaDu细胞活性氧（ROS）含量及线粒体膜电位的影响，激光共 聚焦显微镜观察GEN对FaDu细胞线粒体膜通透性转换孔的影响，可见分光光度法检测细胞中乳酸的含量，WB法检测细胞中 UCP2蛋白的表达变化。结果：与对照组相比，GEN 可显著抑制 FaDu细胞的增殖活力（P<0.05或P<0.01）、细胞中UCP2蛋白 的表达（P<0.05），降低线粒体膜电位（P<0.05或P<0.01）、乳酸含量（P<0.000 1），改变细胞线粒体膜孔道通透性，提高细胞中ROS 水平（P<0.05或P<0.01）。结论：GEN通过调节细胞中UCP2的表达水平进而影响细胞的氧化还原能力及线粒体功能，从而发挥 抑制人下咽癌FaDu细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用。
目的：探讨解偶联蛋白2（UCP2）抑制剂京尼平（GEN）对人下咽癌FaDu细胞增殖及线粒体功能的影响。方法：使用 不同浓度的GEN作用于 FaDu 细胞 24 h，实验分为GEN 0（对照）、50、100、200和400 μmol/L组。采用CCK-8法检测各组细胞 增殖能力，DCFH-DA探针及JC-1染色联合流式细胞术检测GEN对FaDu细胞活性氧（ROS）含量及线粒体膜电位的影响，激光共 聚焦显微镜观察GEN对FaDu细胞线粒体膜通透性转换孔的影响，可见分光光度法检测细胞中乳酸的含量，WB法检测细胞中 UCP2蛋白的表达变化。结果：与对照组相比，GEN 可显著抑制 FaDu细胞的增殖活力（P<0.05或P<0.01）、细胞中UCP2蛋白 的表达（P<0.05），降低线粒体膜电位（P<0.05或P<0.01）、乳酸含量（P<0.000 1），改变细胞线粒体膜孔道通透性，提高细胞中ROS 水平（P<0.05或P<0.01）。结论：GEN通过调节细胞中UCP2的表达水平进而影响细胞的氧化还原能力及线粒体功能，从而发挥 抑制人下咽癌FaDu细胞增殖并诱导细胞凋亡的作用。
2024, 31(7):687-693.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.007
摘要:
目的：探讨扁蒴藤素（Pris）调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态（VM）的影响及其 机制。方法：采用MTT法检测不同浓度Pris对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用，以选取合适的干预浓度。将HeLa细胞分为对 照组、环巴胺组、Pris组、Pris+pc-NC组和Pris+pc-Shh组。采用MTT法、EdU法检测各组细胞的增殖能力，Transwell小室法、流式 细胞术检测各组细胞的迁移及侵袭能力和细胞凋亡率，体外血管生成实验观察VM形成情况，qPCR法检测各组细胞中Shh和 Gli1 mRNA表达水平，WB法检测细胞中血管内皮生长因子A（VEGF-A）、血管内皮钙黏素（VE-cadherin）、Ki-67、caspase-3及与 Shh/Gli1信号通路相关蛋白表达水平。结果：0.25~2.5 mmol/L的Pris 对HeLa细胞增殖均有显著抑制作用，选择1.5 mmol/L的 Pris进行后续实验。对照组细胞形成良好的管腔结构，与对照组相比，环巴胺组、Pris组和Pris+pc-NC组HeLa细胞管腔结构被明 显破坏，细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数目、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显 著降低（均P<0.05），细胞凋亡率和caspase-3表达均显著升高（均P<0.05）；环巴胺组与Pris组HeLa细胞各项检测指标比较差异均 无统计学意义（均P>0.05）；与Pris+pc-NC组相比，Pris+pc-Shh组细胞管腔结构形成明显改善，细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵 袭细胞数、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著升高（均P<0.05），细胞凋亡率和caspase-3 表达均显著降低（均P<0.05）。结论：Pris抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭和VM的形成并促进细胞凋亡，可能与阻断 Shh/Gli1信号通路有关。
目的：探讨扁蒴藤素（Pris）调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态（VM）的影响及其 机制。方法：采用MTT法检测不同浓度Pris对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用，以选取合适的干预浓度。将HeLa细胞分为对 照组、环巴胺组、Pris组、Pris+pc-NC组和Pris+pc-Shh组。采用MTT法、EdU法检测各组细胞的增殖能力，Transwell小室法、流式 细胞术检测各组细胞的迁移及侵袭能力和细胞凋亡率，体外血管生成实验观察VM形成情况，qPCR法检测各组细胞中Shh和 Gli1 mRNA表达水平，WB法检测细胞中血管内皮生长因子A（VEGF-A）、血管内皮钙黏素（VE-cadherin）、Ki-67、caspase-3及与 Shh/Gli1信号通路相关蛋白表达水平。结果：0.25~2.5 mmol/L的Pris 对HeLa细胞增殖均有显著抑制作用，选择1.5 mmol/L的 Pris进行后续实验。对照组细胞形成良好的管腔结构，与对照组相比，环巴胺组、Pris组和Pris+pc-NC组HeLa细胞管腔结构被明 显破坏，细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数目、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显 著降低（均P<0.05），细胞凋亡率和caspase-3表达均显著升高（均P<0.05）；环巴胺组与Pris组HeLa细胞各项检测指标比较差异均 无统计学意义（均P>0.05）；与Pris+pc-NC组相比，Pris+pc-Shh组细胞管腔结构形成明显改善，细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵 袭细胞数、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著升高（均P<0.05），细胞凋亡率和caspase-3 表达均显著降低（均P<0.05）。结论：Pris抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭和VM的形成并促进细胞凋亡，可能与阻断 Shh/Gli1信号通路有关。
2024, 31(7):694-699.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.008
摘要:
目的：探讨异莲心碱（Iso）通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法：用 10、20和40 μmol/L的Iso处理结肠癌SW480细胞，CCK-8法、流式细胞术和WB法分别检测Iso对细胞增殖活力、凋亡和自噬相关 蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62表达的影响。然后，用20 μmol/L的Iso和25 μmol/L的PI3K激活剂740 Y-P分别处理SW480细胞，将细 胞分为对照组、740 Y-P组、Iso组和Iso+740 Y-P组，流式细胞术、WB法检测Iso和740 Y-P对各组细胞凋亡及细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、 p62、PI3K、p-PI3K、 mTOR和p-mTOR蛋白表达的影响。结果：10、20和40 μmol/L的Iso处理后，SW480细胞增殖活力均显著下 降（均P<0.05），细胞凋亡率均显著升高（均P<0.05），LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著上调（均P<0.05），p26蛋白表达显著下调（P<0.05）。 Iso和740 Y-P处理后，与对照组相比，740 Y-P 组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著下降（均P<0.05），p26、p-PI3K/PI3K和 p-mTOR/mTOR 表达均显著升高（均 P<0.05）；Iso 组 细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高（均 P<0.05），p26、p-PI3K/PI3K和 p-mTOR/mTOR 表达均显著下降（均 P<0.05）；与 740 Y-P 组相比，Iso+740 Y-P 组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高（P<0.05）， p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降（均P<0.05）；与Iso组相比，Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达下 降（均P<0.05），p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高（均P<0.05）。结论：Iso通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路 抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬。
目的：探讨异莲心碱（Iso）通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法：用 10、20和40 μmol/L的Iso处理结肠癌SW480细胞，CCK-8法、流式细胞术和WB法分别检测Iso对细胞增殖活力、凋亡和自噬相关 蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p62表达的影响。然后，用20 μmol/L的Iso和25 μmol/L的PI3K激活剂740 Y-P分别处理SW480细胞，将细 胞分为对照组、740 Y-P组、Iso组和Iso+740 Y-P组，流式细胞术、WB法检测Iso和740 Y-P对各组细胞凋亡及细胞中LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、 p62、PI3K、p-PI3K、 mTOR和p-mTOR蛋白表达的影响。结果：10、20和40 μmol/L的Iso处理后，SW480细胞增殖活力均显著下 降（均P<0.05），细胞凋亡率均显著升高（均P<0.05），LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著上调（均P<0.05），p26蛋白表达显著下调（P<0.05）。 Iso和740 Y-P处理后，与对照组相比，740 Y-P 组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达均显著下降（均P<0.05），p26、p-PI3K/PI3K和 p-mTOR/mTOR 表达均显著升高（均 P<0.05）；Iso 组 细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高（均 P<0.05），p26、p-PI3K/PI3K和 p-mTOR/mTOR 表达均显著下降（均 P<0.05）；与 740 Y-P 组相比，Iso+740 Y-P 组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达升高（P<0.05）， p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著下降（均P<0.05）；与Iso组相比，Iso+740 Y-P组细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达下 降（均P<0.05），p26、p-PI3K/PI3K和p-mTOR/mTOR表达均显著升高（均P<0.05）。结论：Iso通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路 抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬。
2024, 31(7):700-706.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.009
摘要:
目的：探讨同源重组修复（HRR）基因突变对晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者免疫治疗疗效和预后的影响。方法： 收集2018年3月至2023年4月间在郑州大学第一附属医院接受PD-1抑制剂治疗的124例晚期NSCLC患者的临床资料。根据有 无HRR基因突变将患者分为突变组（n=57例）和野生组（n=67例），采用卡方检验或Fisher’s精确检验比较两组患者的临床特征 及免疫治疗疗效差异，采用Kaplan-Meier方法比较两组患者的PFS，采用单因素和多因素Cox回归分析PFS的影响因素。结果： HRR基因突变组中鳞癌及肿瘤突变负荷（TMB）≥10 mut/Mb 的占比显著多于野生组（54.4% vs 32.8%，61.4% vs 29.9%，均 P<0.05）。HRR基因突变组与野生组患者的ORR分别为17.5%和10.4%（P=0.252），DCR分别为86.0%和73.1%（P=0.080）。HRR 基因突变组与野生组的PFS比较差异具有统计学意义（6.8个月 vs 3.9个月，P<0.001）。多因素分析结果显示，有无HRR基因突变 [HR=0.550，95%C（I 0.352, 0.860）, P=0.009]与免疫治疗线数[HR=0.468，95%C（I 0.312, 0.702）, P<0.001]和PFS显著相关。结论： HRR基因突变组患者的免疫治疗疗效优于野生组患者，HRR基因突变是晚期NSCLC患者免疫治疗预后的独立保护因素。
目的：探讨同源重组修复（HRR）基因突变对晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者免疫治疗疗效和预后的影响。方法： 收集2018年3月至2023年4月间在郑州大学第一附属医院接受PD-1抑制剂治疗的124例晚期NSCLC患者的临床资料。根据有 无HRR基因突变将患者分为突变组（n=57例）和野生组（n=67例），采用卡方检验或Fisher’s精确检验比较两组患者的临床特征 及免疫治疗疗效差异，采用Kaplan-Meier方法比较两组患者的PFS，采用单因素和多因素Cox回归分析PFS的影响因素。结果： HRR基因突变组中鳞癌及肿瘤突变负荷（TMB）≥10 mut/Mb 的占比显著多于野生组（54.4% vs 32.8%，61.4% vs 29.9%，均 P<0.05）。HRR基因突变组与野生组患者的ORR分别为17.5%和10.4%（P=0.252），DCR分别为86.0%和73.1%（P=0.080）。HRR 基因突变组与野生组的PFS比较差异具有统计学意义（6.8个月 vs 3.9个月，P<0.001）。多因素分析结果显示，有无HRR基因突变 [HR=0.550，95%C（I 0.352, 0.860）, P=0.009]与免疫治疗线数[HR=0.468，95%C（I 0.312, 0.702）, P<0.001]和PFS显著相关。结论： HRR基因突变组患者的免疫治疗疗效优于野生组患者，HRR基因突变是晚期NSCLC患者免疫治疗预后的独立保护因素。
2024, 31(7):707-714.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.010
摘要:
目的：筛选影响胃癌患者预后及治疗的关键基因，分析关键基因微纤维相关蛋白2（MFAP2）在提示胃癌患者预后及免 疫治疗敏感性中的价值。方法：从TCGA数据库下载胃癌患者的癌和癌旁组织的表达谱数据及临床资料。综合加权基因共表达 网络分析（WGCNA）和单因素Cox回归分析筛选与胃癌预后显著相关的基因。使用多个患者队列评估关键基因MFAP2的预后价 值，分析其效能和临床病理指标的相关性。使用多个在线数据库数据及算法分析MFAP2与肿瘤免疫微环境的关联，免疫表型评分 （IPS）联合免疫治疗患者队列分析MFAP2在预测免疫治疗响应性中的价值。采用多数据集验证 MFAP2在胃癌及癌旁组织中 的表达差异。结果：蓝色模块与胃癌患者的生存结局相关性最高（R=0.17，P<0.001）；进一步与预后相关基因取交集，共筛选到20个 关键基因。关键基因MFAP2的高表达提示胃癌的不良预后和病理进展（HR>1，P<0.05）。MFAP2与肿瘤相关成纤维细胞密切相关， 高表达MFAP2的胃癌患者对免疫治疗更不敏感。多数据集验证结果显示，MFAP2 mRNA在胃癌组织中高表达（P<0.05或P<0.01）。 结论：MFAP2的高表达是胃癌预后不良和免疫治疗响应不佳的提示因子，有望作为胃癌的新型治疗靶点和预后标志物。
目的：筛选影响胃癌患者预后及治疗的关键基因，分析关键基因微纤维相关蛋白2（MFAP2）在提示胃癌患者预后及免 疫治疗敏感性中的价值。方法：从TCGA数据库下载胃癌患者的癌和癌旁组织的表达谱数据及临床资料。综合加权基因共表达 网络分析（WGCNA）和单因素Cox回归分析筛选与胃癌预后显著相关的基因。使用多个患者队列评估关键基因MFAP2的预后价 值，分析其效能和临床病理指标的相关性。使用多个在线数据库数据及算法分析MFAP2与肿瘤免疫微环境的关联，免疫表型评分 （IPS）联合免疫治疗患者队列分析MFAP2在预测免疫治疗响应性中的价值。采用多数据集验证 MFAP2在胃癌及癌旁组织中 的表达差异。结果：蓝色模块与胃癌患者的生存结局相关性最高（R=0.17，P<0.001）；进一步与预后相关基因取交集，共筛选到20个 关键基因。关键基因MFAP2的高表达提示胃癌的不良预后和病理进展（HR>1，P<0.05）。MFAP2与肿瘤相关成纤维细胞密切相关， 高表达MFAP2的胃癌患者对免疫治疗更不敏感。多数据集验证结果显示，MFAP2 mRNA在胃癌组织中高表达（P<0.05或P<0.01）。 结论：MFAP2的高表达是胃癌预后不良和免疫治疗响应不佳的提示因子，有望作为胃癌的新型治疗靶点和预后标志物。
2024, 31(7):715-721.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.011
摘要:
肿瘤免疫逃逸是肿瘤恶性进展的关键阶段，也是肿瘤免疫治疗所面临的一个主要挑战。研究表明，DNA甲基化可通过 影响肿瘤抗原、MHCⅠ类分子、免疫检查点分子和免疫基因的表达，以及巨噬细胞的募集和极化介导肿瘤免疫逃逸的发生与进 展，是肿瘤有前途的治疗靶点。目前，DNA去甲基化药物在肿瘤治疗领域的应用取得了新的进展，包括与免疫检查点抑制剂 （ICI）、其他免疫药物和化疗药物等的联合应用，以及纳米药物和肿瘤疫苗等多种新型药物的开发等。为促进DNA去甲基化药物 作为抗肿瘤药物的发展，本文探讨了DNA甲基化在肿瘤免疫逃逸中的作用机制及DNA去甲基化药物在实验室与临床相关试验 研究现状，提出了改进措施和可能的研究方向。
肿瘤免疫逃逸是肿瘤恶性进展的关键阶段，也是肿瘤免疫治疗所面临的一个主要挑战。研究表明，DNA甲基化可通过 影响肿瘤抗原、MHCⅠ类分子、免疫检查点分子和免疫基因的表达，以及巨噬细胞的募集和极化介导肿瘤免疫逃逸的发生与进 展，是肿瘤有前途的治疗靶点。目前，DNA去甲基化药物在肿瘤治疗领域的应用取得了新的进展，包括与免疫检查点抑制剂 （ICI）、其他免疫药物和化疗药物等的联合应用，以及纳米药物和肿瘤疫苗等多种新型药物的开发等。为促进DNA去甲基化药物 作为抗肿瘤药物的发展，本文探讨了DNA甲基化在肿瘤免疫逃逸中的作用机制及DNA去甲基化药物在实验室与临床相关试验 研究现状，提出了改进措施和可能的研究方向。
2024, 31(7):722-727.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.012
摘要:
CAR-T细胞疗法是一种新兴的抗肿瘤免疫细胞疗法，在某些血液系统恶性肿瘤的治疗中取得进展。由于CAR-T细 胞自身存在靶抗原的异质性、自发功能耗竭等问题，同时实体瘤有较强的逃避机体免疫系统的能力，导致单一CAR-T细胞应用于 实体瘤中鲜有成效。CD70是一种Ⅱ型穿膜糖蛋白，在正常人体组织中表达较少或不表达，在多种肿瘤组织中高表达，因此，成为 CAR-T细胞疗法的有效靶点之一。近年来，研究聚焦于靶向CD70的嵌合抗原受体基因修饰T（CD70 CAR-T）细胞在CAR结构 上的不断优化、与其他靶点联合构建双特异性CAR-T细胞（B7H3、CD19等）及联合治疗（PARP抑制剂、溶瘤病毒、表观遗传学调 节剂等），探索增强疗效的新策略。本文论述了CD70 CAR-T细胞疗法的研究进展，分析联合疗法提高疗效的分子机制，为其早 日应用于临床治疗提供了新思路。
CAR-T细胞疗法是一种新兴的抗肿瘤免疫细胞疗法，在某些血液系统恶性肿瘤的治疗中取得进展。由于CAR-T细 胞自身存在靶抗原的异质性、自发功能耗竭等问题，同时实体瘤有较强的逃避机体免疫系统的能力，导致单一CAR-T细胞应用于 实体瘤中鲜有成效。CD70是一种Ⅱ型穿膜糖蛋白，在正常人体组织中表达较少或不表达，在多种肿瘤组织中高表达，因此，成为 CAR-T细胞疗法的有效靶点之一。近年来，研究聚焦于靶向CD70的嵌合抗原受体基因修饰T（CD70 CAR-T）细胞在CAR结构 上的不断优化、与其他靶点联合构建双特异性CAR-T细胞（B7H3、CD19等）及联合治疗（PARP抑制剂、溶瘤病毒、表观遗传学调 节剂等），探索增强疗效的新策略。本文论述了CD70 CAR-T细胞疗法的研究进展，分析联合疗法提高疗效的分子机制，为其早 日应用于临床治疗提供了新思路。
2024, 31(7):728-732.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.013
摘要:
曲妥珠单抗是晚期人表皮生长因子受体2（HER2）阳性胃癌患者治疗的一线用药，耐药问题是曲妥珠单抗治疗中面临 的主要挑战。曲妥珠单抗治疗的耐药机制除了与HER2自身状态有关外，也与PI3K/AKT、MEK/ERK等经典信号通路以及有丝 分裂相关的非经典信号通路的异常激活有关，胃癌肿瘤微环境中代谢及免疫调控的改变也会导致患者对曲妥珠单抗耐药，目前 抗体药物偶联物等新型治疗方案可以克服并改善曲妥珠单抗的耐药性。本文聚焦曲妥珠单抗在HER2阳性胃癌中的耐药机制及 其克服曲妥珠单抗耐药新型疗法的研究进展，为临床优化曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃癌提供了新思路。
曲妥珠单抗是晚期人表皮生长因子受体2（HER2）阳性胃癌患者治疗的一线用药，耐药问题是曲妥珠单抗治疗中面临 的主要挑战。曲妥珠单抗治疗的耐药机制除了与HER2自身状态有关外，也与PI3K/AKT、MEK/ERK等经典信号通路以及有丝 分裂相关的非经典信号通路的异常激活有关，胃癌肿瘤微环境中代谢及免疫调控的改变也会导致患者对曲妥珠单抗耐药，目前 抗体药物偶联物等新型治疗方案可以克服并改善曲妥珠单抗的耐药性。本文聚焦曲妥珠单抗在HER2阳性胃癌中的耐药机制及 其克服曲妥珠单抗耐药新型疗法的研究进展，为临床优化曲妥珠单抗治疗HER2阳性胃癌提供了新思路。
2024, 31(7):733-737.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.014
摘要:
小细胞肺癌（SCLC）是一种预后不良的侵袭性神经内分泌癌，针对SCLC的一线治疗改善有限，目前尚无靶向治疗方 法。Dalta样配体3（DLL3）是Notch信号抑制配体，是一种有吸引力的治疗靶点，其在SCLC细胞表面过表达，而在正常细胞上几 乎不表达。当前正在开发几种DLL3靶向疗法，包括抗体-药物偶联物（ADC）、T细胞衔接器（TCE）分子和嵌合抗原受体基因修饰 （CAR）T细胞疗法，用于治疗SCLC和其他神经内分泌癌。在SCLC治疗中，DLL3靶向ADC药物临床研究结果不理想，但DLL3 靶向TCE和CAR在目前的研究中显示出了有效的抗肿瘤活性。本文回顾了目前正在开发的几种靶向DLL3药物的临床前和临 床试验数据，讨论了DLL3靶向治疗的挑战和机遇，为临床治疗SCLC提供了新思路。
小细胞肺癌（SCLC）是一种预后不良的侵袭性神经内分泌癌，针对SCLC的一线治疗改善有限，目前尚无靶向治疗方 法。Dalta样配体3（DLL3）是Notch信号抑制配体，是一种有吸引力的治疗靶点，其在SCLC细胞表面过表达，而在正常细胞上几 乎不表达。当前正在开发几种DLL3靶向疗法，包括抗体-药物偶联物（ADC）、T细胞衔接器（TCE）分子和嵌合抗原受体基因修饰 （CAR）T细胞疗法，用于治疗SCLC和其他神经内分泌癌。在SCLC治疗中，DLL3靶向ADC药物临床研究结果不理想，但DLL3 靶向TCE和CAR在目前的研究中显示出了有效的抗肿瘤活性。本文回顾了目前正在开发的几种靶向DLL3药物的临床前和临 床试验数据，讨论了DLL3靶向治疗的挑战和机遇，为临床治疗SCLC提供了新思路。
2024, 31(7):738-739.
DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2024.07.015
摘要:
联系方式
- 《中国肿瘤生物治疗杂志》
- 1994年创刊
- 主办单位：中国免疫学会、中国抗癌学会
- 邮编：200433
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- 电子邮箱：cjcb@biother.cn
- 网址:http://www.biother.cn
- 刊号：ISSN 1007-385X
- CN 31-1725/R
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